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उच्च लोडिंग सामग्री वाला इंसुलिन नैनोकण (एनपी) क॑ अलग-अलग खुराक के रूप म॑ अलग-अलग अनुप्रयोग मिललऽ छै ।ई काम के उद्देश्य इंसुलिन-लोडेड चिटोसन नैनोकणऽ के संरचना प॑ फ्रीज-ड्रायिंग आरू स्प्रे-ड्रायिंग प्रक्रिया के प्रभाव के मूल्यांकन करना छै, जेकरा म॑ मैनिटोल के साथ या बिना क्रायोप्रोटेक्टेंट के रूप म॑ ।हम॑ ई नैनोकणऽ के गुणवत्ता के आकलन भी करलकै, ओकरा पुनः विघटन करी क॑.पहिने निर्जलीकरण, चिटोसन/सोडियम ट्राइपोलीफॉस्फेट/इंसुलिन क्रॉस-लिंक नैनोकणऽ के कण आकार क॑ 318 एनएम, पीडीआई 0.18, कैप्सूलीकरण दक्षता 99.4%, आरू लोडिंग 25.01%, आरू लोडिंग 25.01% छेलै ।पुनर्गठन के बाद, सब नैनोकण, सिवाय वू नैनोकणऽ क॑, जेकरा बिना उपयोग के फ्रीज-ड्रायिंग विधि स॑ उत्पादित करलऽ गेलऽ छेलै मैनिटोल केरऽ, अपनऽ गोलाकार कण संरचना क॑ बनाए रखलकै ।या त॑ स्प्रे द्वारा निर्जलित मैनिटोल युक्त नैनोकणऽ के तुलना म॑ मैनिटोल मुक्त स्प्रे-सुखाबै वाला नैनोकणऽ न॑ भी सुखाय क॑ या सुखाय क॑ समान कैप्सूलीकरण दर (98.7%) आरू पीडीआई (0.20) के साथ सबसें छोटऽ औसत कण आकार (376 एनएम) आरू सबसें अधिक लोडिंग सामग्री (25.02%) देखैलकै फ्रीज-ड्रायिंग तकनीक.बिना मैनिटोल कें स्प्रे ड्रायिंग सं सूखल नैनोकणक कें परिणामस्वरूप इंसुलिन कें सब सं तेजी सं रिलीज आ कोशिकीय अवशोषण कें उच्चतम दक्षता सेहो भेल.ई काम सं पता चलय छै कि स्प्रे ड्रायिंग पारंपरिक फ्रीज ड्रायिंग विधियक कें तुलना मे क्रायोप्रोटेक्टेंट कें आवश्यकता कें बिना इंसुलिन नैनोकणक कें निर्जलीकरण कयर सकय छै, जेकरा सं बेसि लोडिंग क्षमता पैदा भ सकय छै, एडिटिव कें आवश्यकता आ संचालन मे कमी आबि सकय छै लागत महत्वपूर्ण लाभ।
19221,2,3 में एकर खोज के बाद सं इंसुलिन आ ओकर दवाई के तैयारी टाइप 1 डायबिटीज (T1DM) आ टाइप 2 डायबिटीज (T1DM) के मरीज के जान बचा लेलक अछि.हालांकि, उच्च आणविक भार वाला प्रोटीन के रूप में एकर गुण के कारण इंसुलिन आसानी सं एकत्रित भ जाइत अछि, प्रोटीओलाइटिक एंजाइम द्वारा टूटि जाइत अछि, आ पहिल-पास सं समाप्त भ जाइत अछि प्रभाव.टाइप 1 डायबिटीज कें निदान वाला लोगक कें जीवन भर इंसुलिन इंजेक्शन कें जरूरत होयत छै.शुरुआत मे टाइप 2 डायबिटीज कें निदान कैल गेल बहुत सं मरीजक कें दीर्घकालिक इंसुलिन इंजेक्शन कें सेहो आवश्यकता होयत छै.दैनिक इंसुलिन इंजेक्शन अइ व्यक्तियक कें लेल दैनिक दर्द आ असुविधा कें गंभीर स्रोत छै, जेकर मानसिक स्वास्थ्य पर नकारात्मक प्रभाव पड़य छै.फलस्वरूप, इंसुलिन कें अन्य रूपक कें प्रशासन कम असुविधा पैदा करएयत छै, जेना मौखिक इंसुलिन प्रशासन कें रूप मे, व्यापक रूप सं अध्ययन कैल जा रहल छै5 कियाकि इ दुनिया भर मे मधुमेह सं पीड़ित लगभग 5 अरब लोगक कें जीवन कें गुणवत्ता कें बहाल करय कें क्षमता रखयत छै.
नैनोकण प्रौद्योगिकी मौखिक इंसुलिन4,6,7.एकटा जे प्रभावी ढंग सं इंसुलिन कें विशिष्ट शरीर स्थल पर लक्षित वितरण कें लेल अपघटन सं कैप्सूल आ सुरक्षा प्रदान करय छै.हालांकि, नैनोकण फॉर्मूलेशन कें उपयोग कें कई सीमा छै, मुख्य रूप सं कण निलंबन कें स्थिरता कें मुद्दाक कें कारण.भंडारण कें दौरान किछ एकत्रीकरण भ सकय छै, जे कें जैव उपलब्धता कें कम करय छै इंसुलिन सं भरल नैनोकण8.एकर अलावा, नैनोकण आ इंसुलिन कें बहुलक मैट्रिक्स कें रासायनिक स्थिरता पर सेहो विचार करनाय आवश्यक छै ताकि इंसुलिन नैनोकण (एनपी) कें स्थिरता सुनिश्चित कैल जा सकय.वर्तमान मे, फ्रीज-ड्रायिंग तकनीक भंडारण कें दौरान अवांछित परिवर्तन कें रोकय कें साथ-साथ स्थिर एनपी बनावा कें लेल स्वर्ण मानक छै9.
लेकिन फ्रीज-ड्रायिंग म॑ क्रायोप्रोटेक्टेंट केरऽ जोड़ऽ के जरूरत होय छै ताकि एनपी केरऽ गोलाकार संरचना क॑ बर्फ केरऽ क्रिस्टल केरऽ यांत्रिक तनाव स॑ प्रभावित नै होय सक॑ ।एहि स॑ लियोफिलाइजेशन के बाद इंसुलिन नैनोकणऽ के लोडिंग म॑ काफी कमी आबै छै, कैन्हेंकि क्रायोप्रोटेक्टेंट वजन अनुपात के अधिकांश भाग प॑ कब्जा करी लै छै ।अतः उत्पादित इंसुलिन एनपी अक्सर ई लेली अनुपयुक्त पाबै जाय छै इंसुलिन कें चिकित्सीय खिड़की प्राप्त करय कें लेल पैघ मात्रा मे सूखा नैनोकणक कें आवश्यकता कें कारण सूखा पाउडर फॉर्मूलेशन, जेना मौखिक गोली आ मौखिक फिल्म कें निर्माण.
स्प्रे ड्रायिंग दवा उद्योग मे तरल चरणक सं सूखा पाउडर कें उत्पादन कें लेल एकटा सुप्रसिद्ध आ सस्ता औद्योगिक पैमाना पर प्रक्रिया छै10,11.कण निर्माण प्रक्रिया पर नियंत्रण कई जैव सक्रिय यौगिक 12, 13 कें सही ढंग सं कैप्सूलीकरण कें अनुमति देयत छै.अइ सं बेसि, इ मौखिक प्रशासन कें लेल कैप्सूल मे राखल प्रोटीन कें तैयारी कें लेल एकटा प्रभावी तकनीक बनि गेल छै.ड्यूरिंग स्प्रे सुखाय सं, पानी बहुत जल्दी वाष्पित भ जायत छै, जे कण कोर कें तापमान कें कम रखय मे मदद करयत छै11,14, जे एकर आवेदन कें गर्मी-संवेदनशील घटक कें कैप्सूल करय मे सक्षम बनायत छै.स्प्रे सुखाय सं पहिले, कोटिंग सामग्री कें पूरा तरह सं समरूप होबाक चाही जइ मे कैप्सूल मे राखल गेल घटक 11,14.फ्रीज-सुखाय कें विपरीत, समरूपीकरण सं पहिले स्प्रे-ड्रायिंग मे कैप्सूलीकरण सं निर्जलीकरण कें दौरान कैप्सूलीकरण कें दक्षता मे सुधार होयत छै.चूंकि स्प्रे-ड्रायिंग कैप्सूलीकरण प्रक्रिया मे क्रायोप्रोटेक्टेंट कें आवश्यकता नहि होयत छै, अइ कें लेल स्प्रे-ड्रायिंग कें उपयोग उच्च लोडिंग सामग्री वाला सूखल एनपी कें उत्पादन कें लेल कैल जा सकय छै.
इ अध्ययन आयन जेल विधि कें उपयोग सं चिटोसन आ सोडियम ट्राइपोलीफॉस्फेट कें क्रॉस-लिंकिंग सं इंसुलिन सं भरल एनपी कें उत्पादन कें रिपोर्ट करय छै.आयन जिलेशन एकटा तैयारी विधि छै जे कुछ परिस्थितिक मे दू या दू सं बेसि आयनिक प्रजातियक कें बीच इलेक्ट्रोस्टैटिक अंतःक्रिया कें माध्यम सं नैनोकणक कें उत्पादन कें अनुमति देयत छै.अनुकूलित चिटोसन/सोडियम कें निर्जलीकरण करय कें लेल फ्रीज-ड्रायिंग आ स्प्रे-ड्रायिंग दूनू तकनीक कें उपयोग कैल गेलय ट्राइपोलीफॉस्फेट/इंसुलिन क्रॉस-लिंक नैनोकण.निर्जलीकरण के बाद, ओकरऽ आकृति विज्ञान के विश्लेषण एसईएम द्वारा करलऽ गेलऽ छेलै ।उनकरऽ आकार वितरण, सतह चार्ज, पीडीआई, कैप्सूलीकरण दक्षता, आरू लोडिंग सामग्री क॑ मापी क॑ ओकरऽ पुनर्संयोजन क्षमता के मूल्यांकन करलऽ गेलऽ छेलै ।विभिन्न निर्जलीकरण विधि स॑ उत्पादित पुनः घुलनशील नैनोकणऽ के गुणवत्ता के भी मूल्यांकन ओकरऽ इंसुलिन संरक्षण, रिलीज व्यवहार, व्यवहार के तुलना करी क॑ करलऽ गेलऽ छेलै । आ कोशिकीय अवशोषण प्रभावकारिता।
मिश्रित घोल केरऽ पीएच आरू चिटोसन आरू इंसुलिन केरऽ अनुपात दू प्रमुख कारक छै जे अंतिम एनपी केरऽ कण आकार आरू कैप्सूलीकरण दक्षता (ईई) क॑ प्रभावित करै छै, कैन्हेंकि ई सीधे आयनोट्रोपिक जिलेशन प्रक्रिया क॑ प्रभावित करै छै ।मिश्रित घोल केरऽ पीएच कण आकार आरू कैप्सूलीकरण दक्षता स॑ बहुत सहसंबंधित दिखालऽ गेलऽ छेलै (चित्र 1a).जैना कि चित्र 1a म॑ दिखालऽ गेलऽ छै, कैन्हेंकि पीएच स॑ बढ़ी गेलऽ छै 4.0 स॑ 6.0 तलक औसत कण आकार (nm) म॑ कमी ​​आबी गेलै आरू ईई म॑ काफी वृद्धि होय गेलै, जबकि जब॑ पीएच बढ़ी क॑ 6.5 होय गेलै त॑ औसत कणऽ के आकार बढ़ै लगलै आरू ईई म॑ कोनो बदलाव नै आबी गेलै ।जैना-जैना चिटोसन आरू इंसुलिन के अनुपात बढ़ै छै, औसत कण आकार भी बढ़ै छै ।एकरऽ अलावा ईई म॑ कोनो बदलाव नै देखलऽ गेलै जब॑ नैनोकण क॑ द्रव्यमान अनुपात म॑ तैयार करलऽ गेलै 2.5:1 (w/w) (चित्र 1b) स॑ अधिक चिटोसन/इंसुलिन ।अतः, ई अध्ययन म॑ इष्टतम तैयारी केरऽ स्थिति (पीएच 6.0, 2.5:1 केरऽ चिटोसन/इंसुलिन द्रव्यमान अनुपात) के उपयोग आगू के अध्ययन लेली इंसुलिन-लोडेड नैनोकण तैयार करै लेली करलऽ गेलऽ छेलै ।ई तैयारी केरऽ स्थिति के तहत नैनोकणऽ के औसत कण आकार क॑ अनुकूलित करलऽ गेलऽ छेलै 318 एनएम (चित्र 1c), पीडीआई 0.18, एम्बेडिंग दक्षता 99.4%, जीटा विभव 9.8 एमवी, आरू इंसुलिन लोडिंग 25.01% (एम/एम) छेलै ।संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (टीईएम) परिणाम के आधार पर, अनुकूलित नैनोकण अपेक्षाकृत एक समान आकार (चित्र 1d) के साथ मोटा-मोटी गोलाकार आरू असतत छेलै ।
इंसुलिन नैनोकणक कें पैरामीटर अनुकूलन: (क) इंसुलिन नैनोकणक (चीटोसन आ इंसुलिन कें 5:1 द्रव्यमान अनुपात पर तैयार कैल गेलय) कें औसत व्यास आ कैप्सूलीकरण दक्षता (ईई) पर पीएच कें प्रभाव; (ख) चिटोसन आ इंसुलिन एनपी (पीएच 6 पर तैयार) कें औसत व्यास आ कैप्सूलीकरण दक्षता (ईई) पर इंसुलिन कें द्रव्यमान अनुपात कें प्रभाव; (ग) अनुकूलित इंसुलिन नैनोकणों के कण आकार वितरण; (घ) अनुकूलित इंसुलिन एनपीएस के टीईएम माइक्रोग्राफ |
ई सर्वविदित छै कि चिटोसन एकटा कमजोर पॉलीइलेक्ट्रोलाइट छै जेकरऽ pKa 6.5 छै.ई अम्लीय मीडिया म॑ सकारात्मक चार्ज होय छै, कैन्हेंकि एकरऽ मुख्य अमीनो समूह हाइड्रोजन आयन द्वारा प्रोटोनेटेड होय छै15.अतः एकरऽ उपयोग अक्सर नकारात्मक चार्ज वाला मैक्रोमोलेकुलस क॑ कैप्सूल करै लेली वाहक के रूप म॑ करलऽ जाय छै ।ई अध्ययन म॑ चिटोसन के उपयोग इंसुलिन क॑ एक आइसोइलेक्ट्रिक बिंदु के साथ कैप्सूल करै लेली करलऽ गेलऽ छेलै 5.3.Since chitosan is used as a coating material, with the increase of its proportion, the thickness of the outer layer of the nanoparticles increases correspondingly, resulting in a larger average particle size.In addition, higher levels of chitosan can encapsulate more insulin.In our case, EE was highest when the ratio of chitosan and insulin reached 2.5:1, and there was no significant change in EE जखन अनुपात बढ़ैत रहल।
चिटोसन आरू इंसुलिन के अनुपात के अलावा, पीएच न॑ एनपीएस के तैयारी म॑ भी अहम भूमिका निभैलकै ।Gan et al. 17 न॑ चिटोसन नैनोकणऽ के कण आकार प॑ पीएच केरऽ प्रभाव के अध्ययन करलकै ।हुनी क॑ पीएच 6.0 तलक पहुँचै तलक कणऽ के आकार म॑ लगातार कमी मिललै, आरू पीएच > 6.0 प॑ कणऽ के आकार म॑ काफी वृद्धि देखलऽ गेलै, जे हमरऽ अवलोकन के अनुरूप छै ।ई घटना ई तथ्य के कारण छै कि पीएच बढ़ला के साथ इंसुलिन अणु नकारात्मक सतह आवेश प्राप्त करै छै, ई तरह, पक्ष म॑ छै चिटोसन/सोडियम ट्राइपोलीफॉस्फेट (टीपीपी) परिसर के साथ इलेक्ट्रोस्टैटिक बातचीत, जेकरऽ परिणामस्वरूप छोटऽ कण आकार आरू उच्च ईई .हालांकि, जब॑ पीएच क॑ 6.5 तलक समायोजित करलऽ गेलऽ छेलै, त॑ चीटोसन प॑ अमीनो समूहऽ क॑ डिप्रोटोनेशन करलऽ गेलऽ छेलै, जेकरऽ परिणामस्वरूप चिटोसन फोल्डिंग होय गेलऽ छेलै ।इस तरह, उच्च पीएच के परिणामस्वरूप एमिनो आयन क॑ टीपीपी आरू इंसुलिन के कम संपर्क म॑ आबै छै, जेकरऽ परिणामस्वरूप कम क्रॉस-लिंकिंग, बड़ऽ अंतिम औसत होय छै कण आकार आ कम ईई।
फ्रीज-ड्राई आ स्प्रे-ड्राई एनपी कें आकृति संबंधी गुणक कें विश्लेषण बेहतर निर्जलीकरण आ पाउडर निर्माण तकनीक कें चयन कें मार्गदर्शन कयर सकय छै.पसंदीदा विधि दवा स्थिरता, एक समान कण आकार, उच्च दवा लोडिंग आ मूल घोल मे नीक घुलनशीलता प्रदान करबाक चाहि.अइ अध्ययन मे, दूनू तकनीक कें बेहतर तुलना करय कें लेल, निर्जलीकरण कें दौरान 1% मैनिटोल कें साथ या बिना इंसुलिन एनपी कें उपयोग कैल गेलय.मैनिटोल कें उपयोग कें रूप मे कैल जायत छै फ्रीज ड्रायिंग आ स्प्रे ड्रायिंग कें लेल विभिन्न ड्राई पाउडर फॉर्मूलेशन मे एकटा बल्किंग एजेंट या क्रायोप्रोटेक्टेंट.मैनिटोल कें बिना लियोफिलाइज्ड इंसुलिन नैनोकणक कें लेल, जैना की चित्र 2a मे दिखायल गेल छै, स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (SEM) कें तहत पैघ, अनियमित आ खुरदुरी सतह वाला एकटा अत्यधिक झरझरा पाउडर संरचना देखल गेलय.निर्जलीकरण कें बाद पाउडर मे फीव असतत कणक कें पता चलल (चित्र 2e).ई परिणाम संकेत करलकै कि अधिकांश एनपी बिना कोनों क्रायोप्रोटेक्टेंट के फ्रीज-ड्रायिंग के दौरान विघटित होय गेलऽ छेलै.1% मैनिटोल वाला फ्रीज-ड्राई आरू स्प्रे-ड्राई इंसुलिन नैनोकण के लेलऽ चिकनी सतह वाला गोलाकार नैनोकण देखलऽ गेलऽ छेलै (चित्र 2b,d,f,h).इंसुलिन नैनोकण बिना मैनिटोल के स्प्रे-ड्राई करलऽ गेलऽ छेलै लेकिन सतह पर झुर्रीदार (चित्र 2c).गोलाकार आ झुर्रीदार सतह कें आगू चर्चा निम्नलिखित रिलीज व्यवहार आ कोशिकीय अवशोषण परीक्षण मे कैल गेल छै.सुखाएल एनपी कें दृश्यमान रूप कें आधार पर, बिना मैनिटोल कें स्प्रे-सुखाएल गेल एनपी आ एनपी दूनू कें फ्रीज-ड्राई आ मैनिटोल सं स्प्रे-सुखाएल गेलय महीन एनपीएस पाउडर (चित्र. 2f,g,h).कण सतह के बीच सतह क्षेत्रफल जतेक पैघ होयत अछि, घुलनशीलता ओतबे बेसी होयत आ अतः रिलीज दर ओतबे बेसी होयत अछि |
विभिन्न निर्जल इंसुलिन एनपी के आकृति विज्ञान: (क) बिना मैनिटोल के लियोफिलाइज्ड इंसुलिन एनपी के एसईएम छवि; (ख) मैनिटोल के साथ लियोफिलाइज्ड इंसुलिन एनपी के एसईएम छवि; (ग) के बिना मैनिटोल एसईएम छवि के स्प्रे-सुक्के इंसुलिन एनपी ; (घ) मैनिटोल के साथ स्प्रे-ड्राई करलऽ गेलऽ इंसुलिन एनपी के एसईएम छवि; (ङ) बिना मैनिटोल के लियोफिलाइज्ड इंसुलिन एनपीएस पाउडर के छवि; (च) मैनिटोल के साथ लियोफिलाइज्ड इंसुलिन एनपी के छवि; ( छ) बिना मैनिटोल के स्प्रे-ड्राई इंसुलिन एनपीएस पाउडर के छवि; (ज) मैनिटोल के साथ स्प्रे-ड्राई इंसुलिन एनपीएस पाउडर की छवि |
फ्रीज-ड्रायिंग कें दौरान, मैनिटोल क्रायोप्रोटेक्टेंट कें रूप मे काज करयत छै, जे एनपी कें अनाकार रूप मे रखयत छै आ बर्फ कें क्रिस्टल सं नुकसान कें रोकयत छै19.एकर विपरीत, स्प्रे ड्रायिंग कें दौरान फ्रीजिंग स्टेप नहि होयत छै.अतः अइ विधि मे मैनिटोल कें आवश्यकता नहि होयत छै.वास्तव मे, बिना मैनिटोल कें स्प्रे-ड्राई एनपी सं महीन एनपी पैदा करयत छै जैना की पहिने वर्णित छै.हालांकि, हालांकि, पहिने वर्णित छै. मैनिटोल एखनहु स्प्रे-सुखाय प्रक्रिया मे भरावक कें रूप मे काज कयर सकय छै जे एनपी कें एकटा बेसि गोलाकार संरचना20 (चित्र 2d) द सकय छै, जे ऐहन कैप्सूल मे राखल गेल एनपी कें एक समान रिलीज व्यवहार प्राप्त करय मे मदद करय छै.एकर अलावा, इ स्पष्ट छै कि मैनिटोल (चित्र 2b,d) युक्त फ्रीज-ड्राई आ स्प्रे-ड्राई दूनू इंसुलिन एनपी मे किछ पैघ कणक कें पता लगायल जा सकय छै, जे कें संचय कें कारण भ सकय छै कैप्सूल में बंद इंसुलिन के साथ मिलकर कण कोर में मैनिटोल | To.Chitosan layer.ई ध्यान देबऽ के बात छै कि ई अध्ययन म॑ ई सुनिश्चित करै लेली कि निर्जलीकरण के बाद गोलाकार संरचना बरकरार रहै छै, मैनिटोल आरू चीटोसन के अनुपात क॑ ५:१ प॑ रखलऽ जाय छै, जेकरा स॑ भराव केरऽ बड़ऽ मात्रा सूखलऽ एनपी केरऽ कण आकार क॑ भी बढ़ा सकै छै ।
फूरियर ट्रांसफॉर्म इन्फ्रारेड क्षीण कुल परावर्तन (एफटीआईआर-एटीआर) स्पेक्ट्रोस्कोपी मुक्त इंसुलिन, चिटोसन, चीटोसन, टीपीपी आरू इंसुलिन के भौतिक मिश्रण के विशेषता छेलै.सब निर्जलित एनपी क॑ एफटीआईआर-एटीआर स्पेक्ट्रोस्कोपी के उपयोग स॑ विशेषता देलऽ गेलऽ छेलै ।उल्लेखनीय रूप स॑, कैप्सूलबद्ध एनपी म॑ 1641, 1543 आरू 1412 सेमी-1 के बैंड तीव्रता देखलऽ गेलऽ छेलै मैनिटोल के साथ फ्रीज-ड्राई आरू मैनिटोल के साथ आरू बिना स्प्रे-ड्राई करलऽ गेलऽ एनपी म॑ (चित्र 3).जैना कि पहलें रिपोर्ट करलऽ गेलऽ छै, ताकत म॑ ई वृद्धि चीटोसन, टीपीपी आरू इंसुलिन के बीच क्रॉस-लिंकिंग स॑ जुड़लऽ छेलै ।चीटोसन आरू इंसुलिन के बीच बातचीत के जांच स॑ पता चललै कि इंसुलिन स॑ भरलऽ चिटोसन नैनोकणऽ के एफटीआईआर स्पेक्ट्रा म॑ इंसुलिन स॑ भरलऽ चिटोसन नैनोकणऽ के एफटीआईआर स्पेक्ट्रा म॑, चिटोसन बैंड ओवरलैप होय जाय छै, जेकरा स॑ बढ़ी जाय छै कार्बोनाइल तीव्रता (1641 सेमी-1) आ अमाइन (1543 सेमी-1) बेल्ट.टीपीपी कें ट्राइपोलीफॉस्फेट समूह चिटोसन मे अमोनियम समूह सं जुड़ल छै, जे 1412 सेमी-1 पर एकटा बैंड बनाबै छै.
मुक्त इंसुलिन, चीटोसन, चिटोसन/टीपीपी/इंसुलिन कें भौतिक मिश्रण आ विभिन्न विधियक सं निर्जलीकरण एनपी कें एफटीआईआर-एटीआर स्पेक्ट्रा.
एकरऽ अलावा, ई परिणाम एसईएम म॑ दिखालऽ गेलऽ परिणाम के अनुरूप छै, जेकरा स॑ पता चललै कि कैप्सूल म॑ बंद एनपी क॑ मैनिटोल स॑ छिड़काव आरू फ्रीज-ड्राई करला प॑ दूनू तरह स॑ बरकरार रहै छै, लेकिन मैनिटोल के अभाव म॑ केवल स्प्रे-ड्रायिंग स॑ ही कैप्सूल म॑ बंद कण पैदा होय छै ।एकरऽ विपरीत, बिना मैनिटोल के फ्रीज-ड्राई करलऽ गेलऽ एनपी के एफटीआईआर-एटीआर स्पेक्ट्रल परिणाम भौतिक मिश्रण स॑ बहुत मिलै छै के चिटोसन, टीपीपी, आरू इंसुलिन के.ई परिणाम संकेत करै छै कि बिना मैनिटोल के फ्रीज-ड्राई करलऽ गेलऽ एनपी म॑ चिटोसन, टीपीपी आरू इंसुलिन के बीच के क्रॉस-लिंक अब॑ मौजूद नै छै.एनपीएस संरचना क॑ बिना क्रायोप्रोटेक्टेंट के फ्रीज-ड्रायिंग के दौरान नष्ट करी देलऽ गेलऽ छेलै, जेकरा एसईएम परिणाम म॑ देखलऽ जाब॑ सकै छै (चित्र 2a).निर्जलित इंसुलिन एनपी के आकृति विज्ञान आरू एफटीआईआर परिणाम के आधार प॑, केवल निर्जलीकरण के दौरान मैनिटोल मुक्त एनपी के अपघटन के कारण पुनर्गठन प्रयोग आरू मैनिटोल मुक्त एनपी के लेलऽ लियोफिलाइज्ड, स्प्रे-ड्राई, आरू मैनिटोल मुक्त एनपी के उपयोग करलऽ गेलऽ छेलै । चर्चा।
निर्जलीकरण कें उपयोग दीर्घकालिक भंडारण आ अन्य फॉर्मूलेशन मे पुनः प्रसंस्करण कें लेल कैल जायत छै.भंडारण कें बाद सूखा एनपी कें पुनर्गठन कें क्षमता अलग-अलग फॉर्मूलेशन जैना गोली आ फिल्म मे ओकर उपयोग कें लेल महत्वपूर्ण छै.हम देखलौं कि मैनिटोल कें अभाव मे स्प्रे सं सुखायल गेल इंसुलिन एनपी कें औसत कण आकार पुनर्गठन कें बाद मात्र किछु बढ़ल छै.दोसर तरफ स्प्रे सं सुखायल गेल आ मैनिटोल के साथ फ्रीज-ड्राई इंसुलिन नैनोकणों म॑ काफी वृद्धि होय गेलै (तालिका 1).पीडीआई आरू ईई म॑ ई अध्ययन म॑ सब एनपी के पुनर्संयोजन के बाद (पी > 0.05) काफी बदलाव नै ऐलै (तालिका 1).ई परिणाम संकेत करै छै कि अधिकांश कण पुनः घुलला के बाद बरकरार रहलै.हालांकि, मैनिटोल के जोड़ला स॑ लियोफिलाइज्ड आरू स्प्रे-ड्राई मैनिटोल नैनोकण (तालिका 1).एकर विपरीत, बिना मैनिटोल के स्प्रे-ड्राई एनपीएस के इंसुलिन लोड सामग्री पहिने के समान रहल (तालिका 1)।
सर्वविदित छै कि नैनोकणक कें लोडिंग दवा वितरण कें उद्देश्य सं उपयोग करला पर महत्वपूर्ण छै.कम लोडिंग वाला एनपी कें लेल, चिकित्सीय सीमा पर पहुंचय कें लेल बहुत पैघ मात्रा मे सामग्री कें आवश्यकता होयत छै.हालांकि, एतेक उच्च एनपी सांद्रता कें उच्च चिपचिपाहट कें कारण मौखिक प्रशासन आ इंजेक्शन कें योग्य फॉर्मूलेशन मे असुविधा आ कठिनाई होयत छै, क्रमश: 22 .एकर अतिरिक्त, एनपी गोली आ चिपचिपा बायोफिल्म बनावा कें लेल सेहो उपयोग कैल जैत छै23, 24, जेकरा मे कम लोडिंग स्तर पर एनपी कें पैघ मात्रा मे उपयोग कें आवश्यकता होयत छै, जेकर परिणामस्वरूप पैघ गोली आ मोट बायोफिल्म बनयत छै जे मौखिक अनुप्रयोगक कें लेल उपयुक्त नहि होयत छै.अतः, उच्च इंसुलिन भार वाला निर्जलित एनपी अत्यधिक वांछनीय छै.हमर परिणाम बतायत छै कि मैनिटोल मुक्त स्प्रे-ड्राई एनपी कें उच्च इंसुलिन भार बहुत पेशकश कयर सकय छै इ वैकल्पिक वितरण विधियक कें लेल आकर्षक फायदा.
सबटा निर्जल एनपी कें तीन महीना तइक फ्रिज मे राखल गेलय.एसईएम कें परिणाम सं पता चललै छै कि तीन महीना कें भंडारण कें दौरान सबटा निर्जल एनपी कें आकृति मे कोनों महत्वपूर्ण बदलाव नहि भेल (चित्र 4).पानी मे पुनर्गठन कें बाद, सब एनपी कें ईई मे मामूली कमी देखल गेलय आ तीन महीना कें भंडारण अवधि कें दौरान लगभग थोड़ी मात्रा (~5%) इंसुलिन जारी कैल गेलय (तालिका 2).हालांकि, सब नैनोकण के औसत कण आकार बढ़ल.बिना मैनिटोल के स्प्रे-ड्राई एनपी के कण आकार बढ़ि क 525 एनएम भ गेल, जखन कि मैनिटोल के संग स्प्रे-ड्राई आ फ्रीज-ड्राई एनपी के कण आकार क्रमशः 872 आ 921 एनएम तक बढ़ि गेल (तालिका 2)।
तीन महीना कें लेल संग्रहीत विभिन्न निर्जल इंसुलिन एनपी कें आकृति विज्ञान: (क) मैनिटोल कें साथ लियोफिलाइज्ड इंसुलिन एनपी कें एसईएम छवि; (ख) मैनिटोल के बिना स्प्रे-सुक्के इंसुलिन नैनोकणों की एसईएम छवि; (ग) स्प्रे-सुक्के इंसुलिन एनपी के बिना मैनिटोल एसईएम छवियाँ |
एकरऽ अलावा, मैनिटोल स॑ स्प्रे-ड्राई आरू फ्रीज-ड्राई करलऽ गेलऽ पुनर्गठित इंसुलिन नैनोकणऽ म॑ अवक्षेप देखलऽ गेलऽ छेलै (चित्र S2) ।एकरऽ कारण पानी म॑ ठीक स॑ लटकलऽ नै होय वाला बड़ऽ कण भी होय सकै छै ।उपरोक्त सब परिणाम ई दर्शाबै छै कि स्प्रे ड्रायिंग तकनीक इंसुलिन नैनोकणऽ क॑ निर्जलीकरण स॑ बचाबै सकै छै आरू बिना कोनों फिलर या इंसुलिन नैनोकणऽ के उच्च भार प्राप्त करलऽ जाब॑ सकै छै क्रायोप्रोटेक्टेंट।
निर्जलीकरण के बाद एंजाइमी पाचन के खिलाफ एनपी के सुरक्षात्मक क्षमता के प्रदर्शन करय लेल पेप्सिन, ट्राइप्सिन, आ α-काइमोट्रिप्सिन के साथ पीएच = 2.5 माध्यम में इंसुलिन रिटेन के परीक्षण कयल गेल छल.निर्जलित एनपी के इंसुलिन रिटेन के तुलना ताजा तैयार एनपी के संग कयल गेल छल, आ मुक्त इंसुलिन के उपयोग नकारात्मक नियंत्रण के रूप में कयल गेल छल.एहि अध्ययन में मुक्त इंसुलिन के 4 के भीतर तेजी सं इंसुलिन रिटेनमेंट देखल गेल छल h तीनों एंजाइमी उपचार (चित्र 5a–c) म॑ ।एकरऽ विपरीत, मैनिटोल स॑ फ्रीज-ड्राई करलऽ गेलऽ एनपी आरू मैनिटोल के साथ या बिना स्प्रे-ड्राई करलऽ गेलऽ एनपी केरऽ इंसुलिन उन्मूलन परीक्षण म॑ एंजाइमी पाचन के खिलाफ ई एनपी केरऽ काफी अधिक सुरक्षा देखलऽ गेलऽ छेलै, जे ताजा तैयार इंसुलिन एनपी (चित्र 1).5a-c) के समान छेलै ।पेप्सिन म॑ नैनोकणऽ के मदद स॑, पेप्सिन म॑ नैनोकणऽ के मदद स॑, ट्रिप्सिन, आरू α-काइमोट्रिप्सिन, क्रमशः 4 घंटा के भीतर 50%, 60%, आरू 75% स॑ अधिक इंसुलिन क॑ सुरक्षित करलऽ जाब॑ सकै छै (चित्र 5a–c).ई इंसुलिन-सुरक्षात्मक क्षमता रक्तप्रवाह म॑ अधिक इंसुलिन अवशोषण के संभावना बढ़ा सकै छै25.ई परिणाम स॑ पता चलै छै कि मैनिटोल के साथ या बिना स्प्रे सुखाय आरू मैनिटोल के साथ फ्रीज-ड्राइइंग क॑ संरक्षित करलऽ जाब॑ सकै छै निर्जलीकरण के बाद एनपीएस की इंसुलिन-सुरक्षात्मक क्षमता |
निर्जल इंसुलिन एनपी कें सुरक्षा आ रिलीज व्यवहार: (क) पेप्सिन घोल मे इंसुलिन कें सुरक्षा; (ख) ट्रिप्सिन घोल मे इंसुलिन के सुरक्षा; (ग) α-काइमोट्रिप्सिन घोल द्वारा इंसुलिन के सुरक्षा; ( घ) पीएच = 2.5 घोल मे निर्जल एनपी के रिलीज व्यवहार; (ङ) पीएच = 6.6 घोल मे निर्जल एनपी के रिलीज व्यवहार; (च) पीएच = 7.0 घोल मे निर्जल एनपी के रिलीज व्यवहार |
ताजा तैयार आरू पुनर्गठित सूखी इंसुलिन एनपी क॑ विभिन्न बफर (पीएच = 2.5, 6.6, 7.0) म॑ 37 डिग्री सेल्सियस प॑ इन्क्यूबेशन करलऽ गेलऽ छेलै, जेकरा स॑ पेट, ग्रहणी, आरू ऊपरी छोटी आंत केरऽ पीएच वातावरण के अनुकरण करलऽ गेलऽ छेलै, ताकि इंसुलिन प्रतिरोध प॑ इंसुलिन केरऽ प्रभाव के जांच करलऽ जाय सक॑ । विभिन्न वातावरण मे रिलीज व्यवहार.जठरांत्र मार्ग कें टुकड़ा.पीएच = 2.5 पर, इंसुलिन सं भरल एनपी आ रिसोल्यूबिलाइज्ड ड्राई इंसुलिन एनपी मे पहिल एक घंटा कें भीतर प्रारंभिक फट रिलीज देखल गेलय, ओकर बाद अगिला 5 घंटा मे धीमा रिलीज भेल (चित्र 5d).शुरुआत मे इ तेजी सं रिलीज प्रोटीन अणुक कें तेजी सं सतह विशोषण कें परिणाम सं बेसि संभावना छै जे पूरा तरह सं नहि छै कण केरऽ आंतरिक संरचना म॑ स्थिर करलऽ गेलऽ छेलै ।पीएच = 6.5 प॑, इंसुलिन स॑ भरलऽ एनपी आरू पुनर्गठित सूखी इंसुलिन एनपी न॑ 6 घंटा म॑ एक चिकनी आरू धीमी रिलीज देखैलकै, कैन्हेंकि परीक्षण घोल केरऽ पीएच एनपीएस-तैयार घोल (चित्र 5e) के समान छेलै ।पीएच = 7 प॑ एनपी अस्थिर छेलै आरू पहलऽ दू घंटा के भीतर लगभग पूरा तरह स॑ विघटित होय गेलऽ छेलै (चित्र. 5f).एकर कारण अछि जे चिटोसन के डिप्रोटोनेशन बेसी पीएच पर होइत अछि, जकर परिणामस्वरूप कम कॉम्पैक्ट बहुलक नेटवर्क आ लोडेड इंसुलिन के रिलीज होइत अछि |
एकरऽ अलावा, बिना मैनिटोल के स्प्रे-ड्राई करलऽ गेलऽ इंसुलिन एनपी न॑ अन्य निर्जलीकरण एनपी (चित्र 5d–f) के तुलना म॑ तेजी स॑ रिलीज प्रोफाइल देखैलकै ।जैना कि पहलें वर्णित छै, बिना मैनिटोल के सुखायलऽ गेलऽ पुनर्गठित इंसुलिन एनपी न॑ सबसें छोटऽ कण आकार देखैलकै ।छोटऽ कण एगो बड़ऽ सतह क्षेत्र प्रदान करै छै, ई लेली अधिकांश प्रासंगिक दवा कण सतह प॑ या ओकरऽ पास होतै, जेकरऽ परिणामस्वरूप तेजी स॑ दवा रिलीज होय छै26.
एनपी केरऽ साइटोटोक्सिसिटी केरऽ जांच एमटीटी परख द्वारा करलऽ गेलऽ छेलै ।जैना कि चित्र S4 म॑ दिखालऽ गेलऽ छै, सब निर्जलित एनपी केरऽ 50-500 μg/ml केरऽ सांद्रता प॑ कोशिका व्यवहार्यता प॑ कोनों महत्वपूर्ण प्रभाव नै पाबै गेलऽ छेलै, जेकरा स॑ पता चलै छै कि सब निर्जलित एनपी केरऽ उपयोग चिकित्सीय खिड़की तलक पहुँचै लेली सुरक्षित रूप स॑ करलऽ जाब॑ सकै छै ।
यकृत मुख्य अंग छै जइ कें माध्यम सं इंसुलिन अपन शारीरिक कार्यक कें प्रदर्शन करय छै.HepG2 कोशिका एकटा मानव हेपेटोमा कोशिका लाइन छै जे आमतौर पर एकटा इन विट्रो हेपेटोसाइट अपटेक मॉडल कें रूप मे उपयोग कैल जायत छै.एतय, HepG2 कोशिका कें उपयोग फ्रीज-ड्रायिंग आ स्प्रे-ड्रायिंग विधियक कें उपयोग सं निर्जलित एनपी कें कोशिकीय अवशोषण कें आकलन करय कें लेल करल गेलय छेलै.फ्लो कें उपयोग सं कॉनफोकल लेजर स्कैनिंग सं सेलुलर अपटेक साइटोमेट्री आ दृष्टि 25 μg/mL कें सांद्रता मे मुक्त एफआईटीसी इंसुलिन कें साथ कई घंटाक कें ऊष्मायन कें बाद, ताजा तैयार एफआईटीसी इंसुलिन सं भरल एनपी आ समान इंसुलिन सांद्रता मे निर्जलित एफआईटीसी इंसुलिन सं भरल एनपी मात्रात्मक सूक्ष्मदर्शी (सीएलएसएम) अवलोकन कैल गेलय.बिना मैनिटोल कें लियोफिलाइज्ड एनपी कें निर्जलीकरण कें दौरान नष्ट कैल गेलय आ अइ मे ओकर मूल्यांकन नहि कैल गेलय test.नया तैयार इंसुलिन-लोडेड एनपी, मैनिटोल के साथ लियोफिलाइज्ड एनपी, आरू मैनिटोल के साथ आरू बिना स्प्रे-ड्राई एनपी के अंतःकोशिकीय प्रतिदीप्ति तीव्रता क्रमशः मुक्त के तुलना म॑ 4.3, 2.6, 2.4, आरू 4.1 गुना अधिक छेलै (चित्र 6b).ई परिणाम स॑ पता चलै छै कि कैप्सूलबद्ध इंसुलिन मुक्त इंसुलिन के तुलना म॑ कोशिकीय अवशोषण म॑ अधिक शक्तिशाली होय छै, जेकरऽ मुख्य कारण छै कि अध्ययन म॑ उत्पादित इंसुलिन स॑ भरलऽ नैनोकणऽ के छोटऽ आकार ।
ताजा तैयार एनपी आरू निर्जलित एनपी के साथ 4 घंटा ऊष्मायन के बाद HepG2 कोशिका अवशोषण: (क) HepG2 कोशिका द्वारा FITC-इंसुलिन अवशोषण के वितरण.(ख) प्रवाह कोशिकामिति (n = 3) द्वारा विश्लेषण प्रतिदीप्ति तीव्रता के ज्यामितीय औसत, * मुक्त इंसुलिन के साथ तुलना म॑ P < 0.05.
तहिना सीएलएसएम छवि स॑ पता चललै कि ताजा तैयार एफआईटीसी-इंसुलिन-लोडेड एनपी आरू एफआईटीसी-इंसुलिन-लोडेड स्प्रे-ड्राई एनपी (बिना मैनिटोल के) केरऽ एफआईटीसी प्रतिदीप्ति तीव्रता अन्य नमूना (चित्र 6a) के तुलना म॑ बहुत मजबूत छेलै ।एकरऽ अलावा, मैनिटोल केरऽ जोड़ला स॑ घोल केरऽ अधिक चिपचिपाहट स॑ प्रतिरोध बढ़ी गेलऽ छेलै कोशिकीय अवशोषण कें लेल, जेकरऽ परिणामस्वरूप इंसुलिन प्रसार म॑ कमी ​​आबै छै.ई परिणाम बताबै छै कि मैनिटोल मुक्त स्प्रे-ड्राई एनपी न॑ सबसें अधिक कोशिकीय अवशोषण दक्षता प्रदर्शित करलकै, कैन्हेंकि ओकरऽ कण आकार पुनः विघटन के बाद फ्रीज-ड्राई एनपी स॑ छोटऽ छेलै ।
चिटोसन (औसत आणविक भार 100 केडीए, 75–85% डीएसिटाइल) सिग्मा-एल्ड्रिच.(ओकविले, ओंटारियो, कनाडा) स॑ खरीदलऽ गेलऽ छेलै ।सोडियम ट्राइपोलीफॉस्फेट (टीपीपी) क॑ वीडब्ल्यूआर (रैडनर, पेंसिल्वेनिया, अमेरिका) स॑ खरीदलऽ गेलऽ छेलै ।ई अध्ययन म॑ प्रयोग करलऽ गेलऽ पुनर्संयोजित मानव इंसुलिन फिशर साइंटिफिक (वाल्थम, एमए, अमेरिका) स॑ छेलै ।फ्लोरोसेसिन आइसोथियोसायनेट स॑ (FITC)-लेबल मानव इंसुलिन आरू 4′,6-डायमिडिनो-2-फेनिलिंडोल डाइहाइड्रोक्लोराइड (DAPI) क॑ सिग्मा-एल्ड्रिच.(ओकविले, ओंटारियो, कनाडा) स॑ खरीदलऽ गेलऽ छेलै ।HepG2 कोशिका लाइन क॑ एटीसीसी (मनासस, वर्जीनिया, अमेरिका) स॑ प्राप्त करलऽ गेलऽ छेलै ।अन्य सब अभिकर्मक विश्लेषणात्मक या क्रोमैटोग्राफिक ग्रेड छेलै ।
0.1% एसिटिक एसिड वाला डबल आसुत जल (डीडी पानी) मे घोल क 1 मिलीग्राम/एमएल सीएस घोल तैयार करूं.टीपीपी आ इंसुलिन कें 1 मिलीग्राम/एमएल घोल क्रमशः डीडी पानी आ 0.1% एसिटिक एसिड मे घोल क तैयार करूं.प्री-इमल्शन पॉलीट्रॉन पीसीयू-2-110 हाई स्पीड होमोजेनिजर (ब्रिंकमैन) सं तैयार कैल गेलय Ind. Westbury, NY, USA).तइयारी प्रक्रिया निम्नलिखित छै: सबसे पहिले, 4ml इंसुलिन घोल मे 2ml टीपीपी घोल मिलाएल जायत छै, आ मिश्रण कें 30min तइक हिला देल जायत छै आ पूरा तरह सं मिला देल जायत छै.तखन, मिश्रित घोल कें उच्च गति सं हलचल (10,000 आरपीएम) कें तहत सिरिंज कें माध्यम सं सीएस घोल मे बूंद-बूंद मिला देल गेलय.मिश्रण कें उच्च गति सं हलचल मे राखल गेलय 30 मिनट के लेलऽ एक बर्फ स्नान म॑ हलचल (15,000 आरपीएम), आरू ओकरा क्रॉस-लिंक इंसुलिन NPs.To आरू homogenize आरू इंसुलिन NPs के कण आकार क॑ कम करै लेली एक निश्चित पीएच प॑ समायोजित करलऽ गेलऽ छेलै, ओकरा एक जांच-प्रकार सोनिकेटर (UP 200ST, Hielscher Ultrasonics, Teltow, जर्मनी) के उपयोग करी क॑ एक बर्फ स्नान म॑ एक अतिरिक्त 30 मिनट लेली sonicated करलऽ गेलऽ छेलै ।
इंसुलिन एनपीएस क॑ जेड-औसत व्यास, पॉलीडिस्पर्सिटी इंडेक्स (पीडीआई) आरू जीटा पोटेंशियल केरऽ परीक्षण डायनामिक लाइट स्कैटरिंग (डीएलएस) मापन के उपयोग करी क॑ 25 डिग्री सेल्सियस प॑ डीडी पानी म॑ पतला करी क॑ लिटेसाइजर 500 (एंटन पार, ग्राज़, ऑस्ट्रिया) के उपयोग करी क॑ करलऽ गेलऽ छेलै ।आकृति विज्ञान आरू आकार वितरण क॑ हिताची एच 7600 संचरण इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप (टीईएम) (टीईएम) (हिताची, टोक्यो, जापान), आरू बाद म॑ हिताची इमेजिंग सॉफ्टवेयर (हिताची, टोक्यो, जापान) के उपयोग करी क॑ छवि के विश्लेषण करलऽ गेलऽ छेलै ।इंसुलिन एनपी केरऽ एनकैप्सुलेशन दक्षता (ईई) आरू लोडिंग क्षमता (एलसी) के आकलन करै लेली एनपी क॑ 100 केडीए के आणविक भार कट-ऑफ के साथ अल्ट्राफिल्टरेशन ट्यूब म॑ पिपेट स॑ डाललऽ गेलऽ छेलै आरू 30 के लेलऽ 500 xg प॑ अपकेंद्रित्रित करलऽ गेलऽ छेलै min.छनने वाला पदार्थ म॑ अनकैप्सुलेटेड इंसुलिन क॑ एक एजिलेंट 1100 सीरीज एचपीएलसी सिस्टम (एजिलेंट, सांता क्लारा, कैलिफोर्निया, अमेरिका) के उपयोग करी क॑ मात्रा निर्धारित करलऽ गेलऽ छेलै जेकरा म॑ एक चतुर्धातुक पंप, ऑटोसैंपलर, कॉलम हीटर, आरू डीएडी डिटेक्टर शामिल छेलै ।इंसुलिन क॑ एक C18 कॉलम (ज़ोरबैक्स, 3.5 माइक्रोन, 4.6 मिमी × 150 मिमी, एजिलेंट, अमेरिका) द्वारा विश्लेषण करलऽ गेलऽ छेलै । आरू 214 एनएम पर पता लगाय देलऽ गेलऽ छेलै ।मोबाइल चरण एसीटोनिट्राइल आरू पानी छेलै, जेकरा म॑ 0.1% टीएफए, 10/90 स॑ 100/0 तलक ढाल अनुपात छेलै, आरू 10 मिनट तलक चललऽ गेलऽ छेलै ।मोबाइल चरण क॑ 1.0 मिलीलीटर/मिनट के प्रवाह दर स॑ पंप करलऽ गेलऽ छेलै ।स्तंभ केरऽ तापमान क॑ 20 डिग्री सेल्सियस प॑ सेट करलऽ गेलऽ छेलै ।समीकरणऽ के उपयोग करी क॑ ईई आरू एलसी के प्रतिशत के गणना करलऽ गेलऽ छेलै ।(1) आरू समीकरण (2)।
इंसुलिन एनपी कें अनुकूलित करय कें लेल 2.0 सं 4.0 तइक कें विभिन्न सीएस/इंसुलिन अनुपात कें परीक्षण करल गेलय.तैयारी कें दौरान अलग-अलग मात्रा मे सीएस घोल मिलाएल गेलय, जखन कि इंसुलिन/टीपीपी मिश्रण कें स्थिर राखल गेलय.सब घोल (इंसुलिन, टीपीपी आ सीएस).इंसुलिन एनपी कें निर्माण कें अनुकूलन कें लेल इंसुलिन नैनोकणक कें ईई आ कण आकार कें अलग-अलग पीएच मान आ सीएस/इंसुलिन द्रव्यमान अनुपात पर मूल्यांकन कैल गेलय.
अनुकूलित इंसुलिन एनपी क॑ एल्यूमीनियम कंटेनर प॑ रखलऽ गेलऽ छेलै आरू कुछ टेप स॑ कसलऽ ऊतक स॑ ढकलऽ गेलऽ छेलै ।तदा बाद, पेंच लगाय देलऽ गेलऽ कंटेनर क॑ एक ट्रे ड्रायर स॑ लैस लैबकोन्को फ्रीजोन फ्रीज ड्रायर (लैबकोन्को, कैनसस सिटी, एमओ, अमेरिका) म॑ रखलऽ गेलऽ छेलै ।तापमान आरू वैक्यूम दबाव क॑ -10 °C, 0.350 Torr प॑ पहिलऽ 2 घंटा, आरू 0 °C आ 0.120 Torr कें लेल 24 घंटा कें शेष 22 घंटा कें लेल सूखा इंसुलिन एनपी प्राप्त करय कें लेल.
बुची मिनी स्प्रे ड्रायर बी-290 (BÜCHI, Flawil, स्विट्जरलैंड) कें उपयोग कैप्सूलबद्ध इंसुलिन उत्पन्न करय कें लेल करल गेलय छेलै.चयनित सुखाय कें पैरामीटर छल: तापमान 100 डिग्री सेल्सियस, फीड प्रवाह 3 एल/मिनट, आ गैस प्रवाह 4 एल/मिनट.
निर्जलीकरण सं पहिने आ बाद मे इंसुलिन एनपी कें विशेषता एफटीआईआर-एटीआर स्पेक्ट्रोस्कोपी कें उपयोग सं कैल गेलय.निर्जलित नैनोकणक कें साथ-साथ मुक्त इंसुलिन आ चिटोसन कें विश्लेषण एकटा यूनिवर्सल एटीआर नमूना सहायक उपकरण (पर्किनएलमर, वाल्थम, मैसाचुसेट्स, अमेरिका) सं लैस स्पेक्ट्रम 100 एफटीआईआर स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (पर्किनएलमर, वाल्थम, मैसाचुसेट्स, अमेरिका) कें उपयोग सं कैल गेलय औसत 4000-600 सेमी2 के आवृत्ति सीमा म॑ 4 सेमी2 के रिजोल्यूशन प॑ 16 स्कैन स॑ प्राप्त करलऽ गेलऽ छेलै ।
सूखी इंसुलिन एनपी केरऽ आकृति विज्ञान के आकलन हेलियोस नैनोलैब 650 फोकस आयन बीम-स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप (एफआईबी-एसईएम) (एफईआई, हिल्सबोरो, ओरेगन, अमेरिका) द्वारा कैप्चर करलऽ गेलऽ फ्रीज-ड्राई आरू स्प्रे-ड्राई इंसुलिन एनपी केरऽ एसईएम छवि द्वारा करलऽ गेलऽ छेलै । उपयोग करलौ गेलौ मुख्य पैरामीटर वोल्टेज 5 केवी आरू करंट 30 एमए छेलै ।
सबटा निर्जल इंसुलिन एनपी कें dd पानी मे पुनः घोलल गेलय.निर्जलीकरण कें बाद ओकर गुणवत्ता कें आकलन करय कें लेल पहिने कहल गेलय विधि कें उपयोग सं कण आकार, पीडीआई, ईई आ एलसी कें पुनः परीक्षण कैल गेलय.एनहाइड्रोइंसुलिन एनपी कें स्थिरता कें सेहो लम्बा समय तइक भंडारण कें बाद एनपी कें गुणक कें परीक्षण सं मापल गेलय.एहि अध्ययन मे निर्जलीकरण कें बाद सबटा एनपी कें तीन समय तइक फ्रिज मे संग्रहित कैल गेलय महीना.तीन महीना कें भंडारण कें बाद एनपी कें आकृतिक कण आकार, पीडीआई, ईई आ एलसी कें लेल परीक्षण कैल गेलय.
5 एमएल पुनर्गठित एनपी कें 45 एमएल मे घोलूं जेकरा मे सिम्युलेटेड गैस्ट्रिक द्रव (पीएच 1.2, 1% पेप्सिन युक्त), आंत कें तरल पदार्थ (पीएच 6.8, 1% ट्रिप्सिन युक्त) या काइमोट्रिप्सिन घोल (100 ग्राम/एमएल, फॉस्फेट बफर मे, पीएच 7.8) युक्त छै, ताकि बाद मे एनपी कें सुरक्षा मे इंसुलिन कें प्रभावकारिता कें मूल्यांकन कैल जा सकय निर्जलीकरण.ओकरा 100 आरपीएम कें आंदोलन गति सं 37°C पर इन्क्यूबेट कैल गेलय.500 μL घोल कें अलग-अलग समय बिंदु पर एकत्र कैल गेलय आ इंसुलिन कें सांद्रता एचपीएलसी द्वारा निर्धारित कैल गेलय.
ताजा तैयार आरू निर्जलित इंसुलिन एनपी केरऽ इन विट्रो रिलीज व्यवहार क॑ डायलिसिस बैग विधि (आणविक भार कट-ऑफ 100 केडीए, स्पेक्ट्रा पोर इंक) द्वारा परीक्षण करलऽ गेलऽ छेलै ।ताजा तैयार आरू पुनर्गठित सूखी एनपी क॑ पीएच 2.5, पीएच 6.6, आरू पीएच 7.0 (0.1 एम फॉस्फेट-बफर खारा, 0.1 एम फॉस्फेट-बफर खारा पीबीएस) क्रमशः पेट, ग्रहणी, आ ऊपरी छोट आंत कें पीएच वातावरण कें अनुकरण करय कें लेल.सब नमूनाक कें 200 आरपीएम पर लगातार हिलाबैत 37 डिग्री सेल्सियस पर इन्क्यूबेट कैल गेलय.5 एमएल डायलिसिस बैग कें बाहर तरल पदार्थ कें निम्नलिखित समय पर एस्पिरेट करूं: 0.5, 1, 2, 3, 4, आ 6 घंटा, आ तुरंत आयतन कें ताजा सं भरूं dialysate.द्रव म॑ इंसुलिन दूषित होय के विश्लेषण एचपीएलसी द्वारा करलऽ गेलऽ छेलै, आरू नैनोकणऽ स॑ इंसुलिन रिलीज होय के दर के गणना नैनोकणऽ म॑ कैप्सूल म॑ कैप्सूल करलऽ गेलऽ कुल इंसुलिन आरू रिलीज होय वाला मुक्त इंसुलिन के अनुपात स॑ करलऽ गेलऽ छेलै (समीकरण 3) ।
मानव हेपेटोसेलुलर कार्सिनोमा कोशिका रेखा HepG2 कोशिका कें 60 मिमी व्यास कें बर्तन मे दुलबेको कें संशोधित ईगल कें माध्यम (DMEM) कें उपयोग सं उगाएल गेलय छेलै, जेकरा मे 10% भ्रूण गोजातीय सीरम, 100 IU/mL पेनिसिलिन, आ 100 μg/mL स्ट्रेप्टोमाइसिन29.संस्कृतियक कें 37°C, 95% सापेक्षिक पर बनाए रखल गेलय छेलै आर्द्रता, आरू 5% CO2.अपटेक परख के लेलऽ, HepG2 कोशिका क॑ 1 × 105 कोशिका/एमएल प॑ 8-वेल Nunc Lab-Tek चैम्बर स्लाइड सिस्टम (थर्मो फिशर, एनवाई, अमेरिका) प॑ बीज लगाय देलऽ गेलऽ छेलै ।साइटोटोक्सिसिटी परख के लेलऽ, ओकरा 5 × 104 कोशिका/एमएल के घनत्व प॑ 96-वेल प्लेट (कॉर्निंग, एनवाई, अमेरिका) म॑ बीज लगाय देलऽ गेलऽ छेलै ।
एमटीटी परख कें उपयोग ताजा तैयार आ निर्जलित इंसुलिन एनपीएस30 कें साइटोटोक्सिसिटी कें मूल्यांकन कें लेल करल गेलय छेलै.HepG2 कोशिका कें 96-वेल प्लेट मे 5 × 104 कोशिका/एमएल कें घनत्व पर बीज लगाएल गेलय आ परीक्षण सं पहिले 7 दिन तइक संवर्धित कैल गेलय.इंसुलिन एनपी कें संवर्धन माध्यम मे विभिन्न सांद्रता (50 सं 500 μg/mL) मे पतला करल गेलय आ ओकर बाद कोशिकाअक कें प्रशासित कैल गेलय.24 घंटा कें ऊष्मायन कें बाद, कोशिकाअक कें पीबीएस सं 3 बेर धोल गेलय आ 0.5 मिलीग्राम/एमएल एमटीटी युक्त माध्यम सं अतिरिक्त 4 घंटा तइक इन्क्यूबेट कैल गेलय.एकटा टेकन अनंत एम200 प्रो स्पेक्ट्रोफोटोमीटर कें उपयोग सं 570 एनएम पर पीले टेट्राजोलियम एमटीटी कें बैंगनी फॉर्मेज़न मे एंजाइमी कमी कें माप क साइटोटोक्सिसिटी कें आकलन कैल गेलय प्लेट रीडर (Tecan, Männedorf, स्विट्जरलैंड)।
एनपी केरऽ कोशिकीय अवशोषण दक्षता क॑ कॉनफोकल लेजर स्कैनिंग माइक्रोस्कोपी आरू फ्लो साइटोमेट्री विश्लेषण द्वारा परीक्षण करलऽ गेलऽ छेलै ।नुंक लैब-टेक चैम्बर स्लाइड सिस्टम केरऽ हर कुएं क॑ मुक्त एफआईटीसी-इंसुलिन, एफआईटीसी-इंसुलिन-लोडेड एनपी स॑ उपचारित करलऽ गेलऽ छेलै, आरू 25 μg/mL निर्जलित एफआईटीसी-इंसुलिन एनपी क॑ एक ही एकाग्रता प॑ पुनर्गठित करलऽ गेलऽ छेलै आरू ओकरा लेली इन्क्यूबेशन करलऽ गेलऽ छेलै 4 घंटा.कोशिका क॑ पीबीएस स॑ 3 बार धोलऽ गेलऽ छेलै आरू 4% पैराफॉर्मलडीहाइड स॑ तय करलऽ गेलऽ छेलै ।नाभिक क॑ 4′,6-डायमिडिनो-2-फेनिलिंडोल (DAPI) स॑ रंगलऽ गेलऽ छेलै ।इंसुलिन स्थानीयकरण ओलंपस FV1000 लेजर स्कैनिंग/टू-फोटॉन कॉनफोकल माइक्रोस्कोप (ओलंपस, शिंजुकु सिटी, टोक्यो, जापान) के उपयोग स॑ देखलऽ गेलऽ छेलै ।प्रवाह के लेलऽ साइटोमेट्री विश्लेषण, 10 μg/mL मुक्त FITC-इंसुलिन, FITC-इंसुलिन-लोडेड एनपी, आरू रिसोल्युबिलाइज्ड निर्जलित FITC-इंसुलिन एनपी केरऽ समान सांद्रता क॑ 96-वेल प्लेट म॑ HepG2 कोशिका स॑ बीज करलऽ गेलऽ छेलै आरू 4 घंटा तलक इन्क्यूबेशन करलऽ गेलऽ छेलै .4 घंटा के ऊष्मायन के बाद, कोशिका क॑ हटाय क॑ 3 बार धोलऽ गेलऽ छेलै FBS.5 × 104 कोशिका प्रति नमूना क॑ बीडी एलएसआर II फ्लो साइटोमीटर (बीडी, फ्रैंकलिन लेक्स, न्यू जर्सी, संयुक्त राज्य अमेरिका) द्वारा विश्लेषण करलऽ गेलऽ छेलै ।
सब मान कें औसत ± मानक विचलन कें रूप मे व्यक्त करल गेलय छै.सब समूहक कें बीच तुलना कें आकलन मैक (आईबीएम, एंडिकॉट, न्यूयॉर्क, अमेरिका) कें लेल आईबीएम एसपीएसएस सांख्यिकी 26 द्ववारा एकतरफा एनोवा या टी-परीक्षण कें उपयोग सं कैल गेलय आ पी < 0.05 कें सांख्यिकीय रूप सं महत्वपूर्ण मानल गेलय.
इ अध्ययन बल्किंग एजेंट या क्रायोप्रोटेक्टेंट क्षमता आ उच्च भार क्षमता कें उपयोग सं मानक फ्रीज-ड्रायिंग विधियक कें तुलना मे बेहतर पुनर्गठन कें साथ क्रॉस-लिंक चीटोसन/टीपीपी/इंसुलिन नैनोकणक कें निर्जलीकरण करय कें लेल स्प्रे सुखाय कें लचीलापन आ क्षमता कें प्रदर्शन करय छै.अनुकूलित इंसुलिन नैनोकणक कें औसत कण आकार 318 एनएम आ एकटा कैप्सूलीकरण दक्षता कें उत्पादन भेल 99.4%.निर्जलीकरण के बाद एसईएम आरू एफटीआईआर परिणाम स॑ पता चललै कि गोलाकार संरचना केवल मैनिटोल के साथ आरू बिना स्प्रे-ड्राई एनपी म॑ ही बनाए रखलऽ गेलऽ छेलै आरू मैनिटोल स॑ लियोफिलाइज करलऽ गेलऽ छेलै, लेकिन बिना मैनिटोल के लियोफिलाइज्ड एनपी निर्जलीकरण के दौरान विघटित होय गेलऽ छेलै ।पुनर्गठन क्षमता परीक्षण म॑ बिना मैनिटोल के स्प्रे-ड्राई करलऽ गेलऽ इंसुलिन नैनोकणऽ म॑ सबसें छोटऽ मीनिटोल के आकार आरू सबसें अधिक भार देखलऽ गेलऽ छेलै पुनर्गठन पर.ई सब निर्जल एनपी के रिलीज व्यवहार स॑ पता चललै कि ई पीएच = 2.5 आरू पीएच = 7 के घोल म॑ तेजी स॑ रिलीज होय जाय छै, आरू पीएच = 6.5 के घोल म॑ बहुत स्थिर होय जाय छै ।अन्य पुनः घुललऽ निर्जलित एनपी के तुलना म॑, बिना मैनिटोल के स्प्रे-सुखाय वाला एनपी न॑ सबसें तेजी स॑ रिलीज देखैलकै ।ई परिणाम कोशिकीय अपटेक परख म॑ देखलऽ गेलऽ के अनुरूप छै, जैसनऽ मैनिटोल कें अभाव मे स्प्रे सं सुखायल गेल एनपी लगभग पूरा तरह सं ताजा तैयार एनपी कें कोशिकीय अवशोषण दक्षता कें बनाए रखलक.ई परिणाम सं पता चलै छै कि मैनिटोल मुक्त स्प्रे सुखाय सं तैयार सूखा इंसुलिन नैनोकण अन्य निर्जल खुराक रूपक मे आगू प्रसंस्करण कें लेल सबसे उपयुक्त छै, जेना कि मौखिक गोली या जैव चिपकय वाला फिल्म.
बौद्धिक संपदा कें मुद्दाक कें कारण, वर्तमान अध्ययन कें दौरान उत्पन्न आ/अथवा विश्लेषण कैल गेल डाटासेट सार्वजनिक रूप सं उपलब्ध नहि छै, मुदा उचित अनुरोध पर संबंधित लेखक सं उपलब्ध छै.
कगन, ए टाइप 2 मधुमेह: सामाजिक आरू वैज्ञानिक उत्पत्ति, चिकित्सा जटिलता, आरू मरीज आरू अन्य के लेलऽ निहितार्थ.(मैकफार्लेन, 2009).
सिंह, एपी, गुओ, वाई, सिंह, ए, ज़ी, डब्ल्यू एवं जियांग, पी. इंसुलिन कैप्सूलीकरण के विकास: क्या मौखिक प्रशासन अब संभव है?जे. फार्मेसी.जैव-फार्मेसी.जलाशय.1, 74-92 (2019).
वोंग, सीवाई, अल-सलमी, एच. एवं दास, सीआर मधुमेह के इलाज के लिये मौखिक इंसुलिन-लोडेड लिपोसोम वितरण प्रणाली में हाल की प्रगति।व्याख्या।जे. फार्मेसी.549, 201-217 (2018).