लेख शोध विषय के हिस्सा छै “फली के रोगजनक आ कीट के प्रतिरोधक क्षमता में सुधार”, सब 5 लेख देखू |
फंगल पौधा रोग परिगलन कें कारण एजेंट स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटियोरम (Lib.) डी बैरी विभिन्न मेजबान पौधाक कें संक्रमित करय कें लेल बहु-स्तरीय रणनीति कें उपयोग करय छै. ई अध्ययन म॑ डायमाइन एल-ओर्निथिन, जे अन्य आवश्यक अमीनो एसिड के संश्लेषण क॑ उत्तेजित करै छै, के उपयोग क॑ वैकल्पिक प्रबंधन रणनीति के रूप म॑ प्रस्तावित करलऽ गेलऽ छै ताकि स्यूडोमोनास स्क्लेरोटियोरम के कारण पैदा होय वाला सफेद फफूंदी के प्रति फेसिओलस वल्गेरिस एल के आणविक, शारीरिक आरू जैव रासायनिक प्रतिक्रिया बढ़ैलऽ जाय सक॑ । इन विट्रो प्रयोग स॑ पता चललै कि एल-ओर्निथिन न॑ खुराक प॑ निर्भर तरीका स॑ एस. एतबे नै, ग्रीनहाउस केरऽ परिस्थिति म॑ सफेद फफूंदी केरऽ गंभीरता म॑ काफी कमी आबी सकै छै । एकरऽ अलावा एल-ओर्निथिन न॑ उपचारित पौधा केरऽ विकास क॑ उत्तेजित करलकै, जे ई दर्शाबै छै कि एल-ओर्निथिन केरऽ परीक्षण करलऽ गेलऽ सांद्रता उपचारित पौधा लेली फाइटोटोक्सिक नै छेलै । एकरऽ अलावा, एल-ओर्निथिन न॑ गैर-एन्जाइमेटिक एंटीऑक्सीडेंट (कुल घुलनशील फिनोलिक आरू फ्लेवोनोइड) आरू एंजाइमी एंटीऑक्सीडेंट (कैटालेज (CAT), पेरोक्साइडेज (POX), आरू पॉलीफेनोल ऑक्सीडेज (PPO)) के अभिव्यक्ति म॑ वृद्धि करलकै, आरू तीन एंटीऑक्सीडेंट स॑ संबंधित जीन (PvCAT1, PvSOD, आरू PvGR) के अभिव्यक्ति म॑ वृद्धि करलकै । एकरऽ अलावा, इन सिलिको विश्लेषण स॑ एस. (PlOAH) कार्यात्मक विश्लेषण, संरक्षित डोमेन, आरू टोपोलॉजी के संदर्भ म॑. दिलचस्प बात ई छै कि आलू डेक्स्ट्रोज शोरबा (पीडीबी) माध्यम म॑ एल-ओर्निथिन केरऽ जोड़ला स॑ एस. तहिना एल-ओर्निथिन केरऽ बहिर्जात प्रयोग स॑ उपचारित पौधा स॑ एकत्रित फंगल माइसेलियम म॑ SsOAH जीन केरऽ अभिव्यक्ति म॑ काफी कमी आबी गेलै । अंत मे, एल-ओर्निथिन कें प्रयोग सं पीडीबी माध्यम आ संक्रमित पात दूनू मे ऑक्सालिक एसिड कें स्राव मे काफी कमी आयल. निष्कर्षतः एल-ओर्निथिन रेडॉक्स केरऽ स्थिति क॑ बनाए रखै के साथ-साथ संक्रमित पौधा केरऽ रक्षा प्रतिक्रिया बढ़ाबै म॑ भी अहम भूमिका निभाबै छै । अइ अध्ययन कें परिणाम सफेद फफूंदी कें नियंत्रित करय आ बीन उत्पादन आ अन्य फसलक पर ओकर प्रभाव कें कम करय कें लेल अभिनव, पर्यावरण कें अनुकूल तरीकाक कें विकास मे मदद कयर सकय छै.
सफेद फफूंदी, जे नेक्रोट्रोफिक कवक स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम (Lib.) डी बैरी के कारण होय छै, एकटा विनाशकारी, उपज कम करय वाला बीमारी छै जे वैश्विक बीन (Phaseolus vulgaris L.) उत्पादन लेली गंभीर खतरा पैदा करै छै (बोल्टन एट अल., 2006) । स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटियोरम नियंत्रित करनाय सब सं कठिन मिट्टी सं उत्पन्न फंगल पौधा रोगजनक मे सं एक छै, जेकर मेजबान 600 सं बेसि पौधा प्रजातियक कें व्यापक मेजबान रेंज आ गैर-विशिष्ट तरीका सं मेजबान ऊतकक कें तेजी सं मैसेरेट करय कें क्षमता छै (लियांग आ रोलिंस, 2018)। प्रतिकूल परिस्थितिक मे इ अपन जीवन चक्र कें एकटा महत्वपूर्ण चरण सं गुजरय छै, जे मिट्टी मे कारी, कठोर, बीज जैना संरचना कें रूप मे या संक्रमित पौधाक कें माइसेलियम या स्टेम पिथ मे सफेद, शराबी वृद्धि कें रूप मे लंबा समय तइक सुप्त रहय छै (Schwartz et al., 2005)। एस. स्क्लेरोटिया पोषक तत्वक सं भरपूर होयत छै, मिट्टी मे लंबा समय तइक रह सकय छै, आ बाद कें संक्रमण कें लेल प्राथमिक टीका के रूप मे काज करय छै (श्वार्ट्ज एट अल., 2005)। अनुकूल परिस्थितिक मे स्क्लेरोटिया अंकुरित भ जायत छै आ हवा मे बीजाणु पैदा करयत छै जे पौधा कें जमीन सं ऊपर कें सब भागक कें संक्रमित कयर सकय छै, जइ मे फूल, तने या फली शामिल छै मुदा इ अइ तक सीमित नहि छै (श्वार्ट्ज एट अल., 2005)।
स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम अपन मेजबान पौधाक कें संक्रमित करय कें लेल बहु-स्तरीय रणनीति कें उपयोग करयत छै, जेकरा मे स्क्लेरोटिया अंकुरण सं ल क लक्षणक कें विकास तइक कें समन्वित घटनाक कें एकटा श्रृंखला शामिल छै. प्रारंभ मे एस. तखन कवक पौधाक कें कोशिका भित्ति कें पीएच कें नियंत्रित करय, एंजाइमी अपघटन आ ऊतक आक्रमण कें बढ़ावा देवय (Hegedus and Rimmer, 2005) आ मेजबान पौधा कें ऑक्सीडेटिव फटनाय कें दबाबै कें लेल ऑक्सालिक एसिड, एकटा विरुलेंस कारक कें स्रावित करय छै. इ अम्लीकरण प्रक्रिया पौधाक कें कोशिका भित्ति कें कमजोर करयत छै, जे फंगल कोशिका भित्ति अपघटन एंजाइम (CWDEs) कें सामान्य आ कुशल संचालन कें लेल अनुकूल वातावरण प्रदान करयत छै, जे रोगजनक कें भौतिक बाधा कें दूर करय आ मेजबान ऊतकक मे प्रवेश करय कें अनुमति देयत छै (मार्सियानो एट अल., 1983)। एक बेर प्रवेश करला के बाद एस. घाव आ हाइफल मैट कें प्रगति सं सफेद फफूंदी कें विशेषता लक्षणक कें जन्म होयत छै (हेगेडस आ रिमर, 2005) । एम्हर, मेजबान पौधा पैटर्न पहचान रिसेप्टर्स (पीआरआर) के माध्यम सं रोगजनक सं जुड़ल आणविक पैटर्न (पीएएमपी) के पहचान करैत अछि, जे संकेत घटना के एकटा श्रृंखला के ट्रिगर करैत अछि जे अंततः रक्षा प्रतिक्रिया के सक्रिय करैत अछि.
दशकक कें रोग नियंत्रण प्रयासक कें बावजूद, रोगजनक कें प्रतिरोध, जीवित रहनाय आ अनुकूलन क्षमता कें कारण, अन्य व्यावसायिक फसलक कें तरह, बीन मे पर्याप्त प्रतिरोधी जर्मप्लाज्म कें कमी बनल छै. अइ कें लेल रोग प्रबंधन अत्यंत चुनौतीपूर्ण छै आ एकटा एकीकृत, बहुआयामी रणनीति कें आवश्यकता छै जेकरा मे सांस्कृतिक प्रथाक, जैविक नियंत्रण, आ रासायनिक कवकनाशक कें संयोजन शामिल छै (ओ'सुलिवान एट अल., 2021)। सफेद फफूंदी कें रासायनिक नियंत्रण सब सं बेसि प्रभावी छै, कियाकि कवकनाशक, जखन सही तरीका सं आ सही समय पर लगायल जायत छै, तखन प्रभावी ढंग सं बीमारी कें प्रसार कें नियंत्रित कयर सकय छै, संक्रमण कें गंभीरता कें कम कयर सकय छै आ पैदावार कें नुकसान कें कम सं कम कयर सकय छै. लेकिन, कवकनाशक कें अधिक उपयोग आ अधिक निर्भरता एस. अइ कें लेल पर्यावरण कें अनुकूल विकल्प खोजनाय सर्वोच्च प्राथमिकता बनि गेल छै.
पॉलियामाइन (पीए), जेना पुट्रेसिन, स्पर्मिडिन, स्पर्माइन, आ कैडावेरिन, मिट्टी सं उत्पन्न पौधा रोगजनक कें खिलाफ आशाजनक विकल्प कें रूप मे काज कयर सकय छै, जेकरा सं खतरनाक रासायनिक कवकनाशक कें उपयोग कें पूरा या आंशिक रूप सं कम कैल जा सकय छै (नेहेला आ अन्य, 2024; यी आ अन्य, 2024)। उच्च पौधाक मे, पीए अनेक शारीरिक प्रक्रियाक मे शामिल छै, जेकरा मे कोशिका विभाजन, भेदभाव, आ अजैविक आ जैविक तनाव कें प्रति प्रतिक्रिया शामिल छै, मुदा इ अइ तक सीमित नहि छै (किलिनी आ नेहेला, 2020)। ई एंटीऑक्सीडेंट के रूप म॑ काम करी सकै छै, प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजाति (आरओएस) क॑ स्केवेंज म॑ मदद करी सकै छै, रेडॉक्स होमियोस्टेसिस क॑ बनाए रखै म॑ मदद करी सकै छै (नेहेला आरू किलिनी, 2023), रक्षा स॑ संबंधित जीन क॑ प्रेरित करी सकै छै (रोमेरो आरू अन्य, 2018), विभिन्न चयापचय मार्ग क॑ नियंत्रित करी सकै छै (नेहेला आरू किलिनी, 2023), अंतर्जात फाइटोहार्मोन (नेहेला आरू किलिनी, 2023) क॑ संतुलित करी सकै छै । 2019), प्रणालीगत अर्जित प्रतिरोध (SAR) स्थापित करय छै, आरू पौधा-रोगजनक अंतःक्रिया क॑ नियंत्रित करै छै (नेहेला आरू किलिनी, 2020; असिजा एट अल., 2022; Czerwoniec, 2022)। ध्यान देनाय आवश्यक छै कि पौधाक कें रक्षा मे पीए कें विशिष्ट तंत्र आ भूमिका पौधाक कें प्रजाति, रोगजनक, आ पर्यावरणीय स्थिति कें आधार पर भिन्न-भिन्न होयत छै. पौधाक मे सब सं बेसि प्रचुर मात्रा मे पीए आवश्यक पॉलीअमाइन एल-ओर्निथिन सं जैव संश्लेषण कैल जायत छै (किलिनी आ नेहेला, 2020) ।
एल-ओर्निथिन पौधाक कें विकास आ विकास मे अनेक भूमिका निभायत छै. उदाहरण कें लेल, पिछला अध्ययनक सं पता चललै छै कि चावल (Oryza sativa) मे, ऑर्निथिन नाइट्रोजन रीसाइक्लिंग (Liu et al., 2018), चावल कें उपज, गुणवत्ता आ सुगंध (Lu et al., 2020), आ जल तनाव प्रतिक्रिया (Yang et al., 2000) सं जुड़ल भ सकय छै. एकरऽ अलावा, एल-ओर्निथिन केरऽ बहिर्जात प्रयोग न॑ चीनी बीट (बीटा वल्गेरिस) (हुसेन एट अल., 2019) म॑ सूखा सहनशीलता म॑ काफी वृद्धि करलकै आरू प्याज (एलियम सेपा) (Çavuşoǧlu आरू Çavuşoǧlu, 2021) आरू काजू (Anacardium occidentale) म॑ नमक के तनाव क॑ कम करलकै । पौधे (दा रोचा एट अल., 2012)। अजैविक तनाव रक्षा मे एल-ओर्निथिन कें संभावित भूमिका उपचारित पौधाक मे प्रोलाइन संचय मे एकर शामिल होय कें कारण भ सकय छै. उदाहरण के लेल, प्रोलाइन चयापचय सं संबंधित जीन, जेना कि ऑर्निथिन डेल्टा एमिनोट्रांसफरेज़ (डेल्टा-ओएटी) आ प्रोलाइन डिहाइड्रोजनेज (ProDH1 आ ProDH2) जीन, पहिने सं गैर-मेजबान स्यूडोमोनास सिरिंज उपभेद (सेंथिल-कुमार आ मैसूर, 2012)। दोसरऽ तरफ, रोगजनक केरऽ विकास लेली फंगल ऑर्निथिन डिकार्बोक्जिलेज (ODC) केरऽ आवश्यकता होय छै (Singh et al., 2020) । फ्यूजेरियम ऑक्सीस्पोरम के ओडीसी लक्षित करब च। एसपी। मेजबान-प्रेरित जीन साइलेंसिंग (HIGS) के माध्यम स॑ lycopersici न॑ टमाटर के पौधऽ के फ्यूजेरियम विल्ट के प्रतिरोध म॑ काफी वृद्धि करलकै (सिंह एट अल., 2020) । लेकिन फाइटोपैथोजेन जैसनऽ जैविक तनाव के खिलाफ बहिर्जात ऑर्निथिन आवेदन के संभावित भूमिका के अच्छा अध्ययन नै करलऽ गेलऽ छै । एकरा स॑ भी महत्वपूर्ण बात ई छै कि रोग प्रतिरोधक क्षमता आरू संबद्ध जैव रासायनिक आरू शारीरिक घटना प॑ ऑर्निथिन केरऽ प्रभाव बहुत हद तलक अनदेखा छै ।
फलियां कें एस.स्क्लेरोटियोरम संक्रमण कें जटिलता कें समझनाय प्रभावी नियंत्रण रणनीतियक कें विकास कें लेल महत्वपूर्ण छै. ई अध्ययन म॑ हमरऽ उद्देश्य छेलै कि स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटियोरम संक्रमण के प्रति फलियां के पौधा के रक्षा तंत्र आरू प्रतिरोध बढ़ाबै म॑ एक प्रमुख कारक के रूप म॑ डायमाइन एल-ओर्निथिन के संभावित भूमिका के पहचान करलऽ जाय । हम परिकल्पना करै छियै कि, संक्रमित पौधा के रक्षा प्रतिक्रिया बढ़ाबै के अलावा, एल-ओर्निथिन रेडॉक्स के स्थिति क॑ बनाए रखै म॑ भी अहम भूमिका निभाबै छै । हम प्रस्ताव दै छियै कि एल-ओर्निथिन के संभावित प्रभाव एंजाइमी आरू गैर-एंजाइमी एंटीऑक्सीडेंट रक्षा तंत्र के नियमन आरू फंगल रोगजनकता/विरुलेंस कारक आरू संबद्ध प्रोटीन के साथ हस्तक्षेप स॑ संबंधित छै । एल-ओर्निथिन कें इ दोहरी कार्यक्षमता एकरा सफेद फफूंदी कें प्रभाव कें कम करय आ आम फलियां फसलक कें अइ शक्तिशाली फंगल रोगजनक कें प्रतिरोधक क्षमता बढ़ावा कें लेल एकटा टिकाऊ रणनीति कें लेल आशाजनक उम्मीदवार बनायत छै. वर्तमान अध्ययन कें परिणाम सफेद फफूंदी कें नियंत्रित करय आ फलियां उत्पादन पर ओकर प्रभाव कें कम करय कें लेल अभिनव, पर्यावरण कें अनुकूल तरीकाक कें विकास मे मदद कयर सकय छै.
ई अध्ययन म॑ आम बीन केरऽ एगो संवेदनशील व्यावसायिक किस्म, गीजा ३ (Phaseolus vulgaris L. cv. Giza 3) क॑ प्रयोगात्मक सामग्री के रूप म॑ प्रयोग करलऽ गेलऽ छेलै । स्वस्थ बीज कें कृपापूर्वक फलियां अनुसंधान विभाग, फील्ड क्रॉप्स रिसर्च इंस्टीट्यूट (एफसीआरआई), कृषि अनुसंधान केंद्र (एआरसी), मिस्र कें द्वारा उपलब्ध करायल गेलय. पांच बीज कें ग्रीनहाउस परिस्थितिक (25 ± 2 डिग्री सेल्सियस, सापेक्षिक आर्द्रता 75 ± 1%, 8 घंटा प्रकाश/16 घंटा अन्हार) मे एस. बोवाई कें 7-10 दिन बाद (डीपीएस) अंकुर कें पतला करल गेलय ताकि प्रत्येक गमले मे केवल दू अंकुर एक समान वृद्धि आ तीन पूर्ण रूप सं विस्तारित पात रहय. सबटा गमले मे राखल पौधाक कें दू सप्ताह मे एक बेर पानी देल गेलय आ देल गेल किस्म कें लेल अनुशंसित दर सं मासिक निषेचित कैल गेलय.
एल-ओर्निथिनडायमाइन (जेकरा (+)-(S)-2,5-डायमिनोपेन्टानोइक एसिड कें नाम सं सेहो जानल जायत छै; सिग्मा-एल्ड्रिच, डार्मस्टैड, जर्मनी) कें 500 मिलीग्राम/लीटर सांद्रता तैयार करय कें लेल, 50 मिलीग्राम कें पहिले 100 एमएल बाँझ आसुत जल मे घोलल गेलय. एकरऽ बाद स्टॉक घोल क॑ पतला करी क॑ बाद केरऽ प्रयोग म॑ प्रयोग करलऽ गेलै । संक्षेप म॑, एल-ओर्निथिन सांद्रता केरऽ छह श्रृंखला (12.5, 25, 50, 75, 100, आरू 125 मिलीग्राम/लीटर) केरऽ परीक्षण इन विट्रो म॑ करलऽ गेलऽ छेलै । एकरऽ अलावा बाँझ आसुत जल क॑ नकारात्मक नियंत्रण (मॉक) के रूप म॑ प्रयोग करलऽ गेलऽ छेलै आरू सकारात्मक नियंत्रण के रूप म॑ व्यावसायिक कवकनाशक “रिजोलेक्स-टी” 50% गीला करय योग्य पाउडर (टोक्लोफोस-मिथाइल 20% + थिराम 30%; केजेड-कफ्र एल ज़ायत कीटनाशक आरू रसायन कंपनी, कफर एल ज़ायत, घरबिया गवर्नमेंट, मिस्र) के उपयोग करलऽ गेलऽ छेलै । व्यावसायिक कवकनाशक “रिजोलेक्स-टी” कें पांच सांद्रता (2, 4, 6, 8 आ 10 मिलीग्राम/लीटर) मे इन विट्रो मे परीक्षण कैल गेलय.
आम बीन कें तने आ फली कें नमूनाक कें नमूना व्यावसायिक खेतक सं एकत्र कैल गेलय जे सफेद फफूंदी कें विशिष्ट लक्षणक (आक्रमण दर: 10-30%) दिखायत छै. यद्यपि संक्रमित पौधाक कें अधिकांश सामग्री कें पहचान प्रजाति/प्रकार (संवेदनशील व्यावसायिक किस्म गीजा 3) कें अनुसार कैल गेलय, अन्य, खासकर स्थानीय बाजारक सं प्राप्त, अज्ञात प्रजाति कें छल. एकत्रित संक्रमित सामग्री कें पहिले 0.5% सोडियम हाइपोक्लोराइट घोल सं 3 मिनट तइक सतह पर कीटाणुरहित कैल गेलय, फेर बाँझ आसुत पानी सं कई बेर कुल्ला कैल गेलय आ बाँझ फिल्टर पेपर सं सूखा पोंछल गेलय ताकि अतिरिक्त पानी निकालल जा सकय. तखन संक्रमित अंगक कें मध्य ऊतक (स्वस्थ आ संक्रमित ऊतकक कें बीच) सं छोट-छोट टुकड़ा मे काटल गेलय, आलू डेक्स्ट्रोज अगर (पीडीए) माध्यम पर संवर्धित कैल गेलय आ 25 ± 2 डिग्री सेल्सियस पर 12 घंटा प्रकाश/12 घंटा अन्हार चक्र कें साथ 5 दिन तइक इन्क्यूबेट कैल गेलय ताकि स्क्लेरोटिया कें निर्माण कें उत्तेजित कैल जा सकय. मिश्रित या दूषित संस्कृति सं फंगल आइसोलेट कें शुद्ध करय कें लेल सेहो माइसेलियम टिप विधि कें उपयोग कैल गेलय. शुद्ध फंगल आइसोलेट क॑ सबसें पहल॑ ओकरऽ सांस्कृतिक रूपात्मक विशेषता के आधार प॑ पहचानलऽ गेलऽ छेलै आरू ओकरा बाद सूक्ष्म विशेषता के आधार प॑ एस. अंत मे, कोच कें धारणा कें पूरा करय कें लेल संवेदनशील आम बीन प्रजाति गीजा 3 पर सब शुद्ध आइसोलेट कें रोगजनकता कें लेल परीक्षण करल गेलय.
एकरऽ अलावा, सबसें आक्रामक एस. Baturo-Ciesniewska एट अल., 2017. संक्षेप म॑, आइसोलेट क॑ आलू डेक्स्ट्रोज शोरबा (पीडीबी) म॑ संवर्धित करलऽ गेलऽ छेलै आरू 25 ± 2 डिग्री सेल्सियस प॑ 5-7 दिन तलक इन्क्यूबेशन करलऽ गेलऽ छेलै । एकरऽ बाद फंगल माइसेलियम क॑ एकत्रित करी क॑ चीज़क्लॉथ स॑ छानलऽ गेलै, बाँझ पानी स॑ दू बार धोलऽ गेलै आरू बाँझ फिल्टर पेपर स॑ सुखायलऽ गेलै । जीनोमिक डीएनए क॑ क्विक-डीएनए TM फंगल/बैक्टीरियल मिनीप्रेप किट (Kuramae-Izioka, 1997; Atallah et al., 2022, 2024) के उपयोग स॑ अलग करलऽ गेलऽ छेलै । तखन आईटीएस आरडीएनए क्षेत्र क॑ विशिष्ट प्राइमर जोड़ी ITS1/ITS4 (TCCGTAGGTGAACCTGCGG TCCTCCGCTTATTGATATGC; अपेक्षित आकार: 540 बीपी) ( Baturo-Ciesniewska et al., 2017 ) के उपयोग करी क॑ प्रवर्धित करलऽ गेलऽ छेलै । शुद्ध पीसीआर उत्पाद क॑ अनुक्रमण (बीजिंग आओके डिंगशेंग बायोटेक्नोलॉजी कं, लिमिटेड) लेली प्रस्तुत करलऽ गेलऽ छेलै । आईटीएस आरडीएनए अनुक्रम क॑ सांगर अनुक्रमण विधि के उपयोग करी क॑ द्वि-दिशात्मक रूप स॑ अनुक्रमित करलऽ गेलऽ छेलै । एकरऽ बाद इकट्ठा करलऽ गेलऽ क्वेरी अनुक्रम क॑ जेनबैंक आरू नेशनल सेंटर फॉर बायोटेक्नोलॉजी इन्फॉर्मेशन (एनसीबीआई, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/) म॑ नवीनतम डाटा स॑ तुलना ब्लास्टन सॉफ्टवेयर के उपयोग करी क॑ करलऽ गेलै । क्वेरी अनुक्रम कें तुलना एनसीबीआई जेनबैंक (पूरक तालिका एस 1) मे नवीनतम आंकड़ा सं प्राप्त 20 अन्य एस. विकासवादी विश्लेषण अधिकतम संभावना विधि आरू सामान्य समय-प्रतिवर्ती न्यूक्लियोटाइड प्रतिस्थापन मॉडल (नेई आरू कुमार, 2000) के उपयोग करी क॑ करलऽ गेलऽ छेलै । सबसँ बेसी लॉग-संभावना वाला गाछ देखाओल गेल अछि । अनुमानक खोज कें लेल प्रारंभिक वृक्ष कें चयन पड़ोसी-जोड़य वाला (एनजे) गाछ (कुमार एट अल., 2024) आ अधिकतम मितव्ययिता (एमपी) वृक्ष कें बीच अधिक लॉग-संभावना वाला गाछ कें चयन करय सं करल जाय छै. एनजे ट्री केरऽ निर्माण सामान्य समय-रिवर्सिबल मॉडल (नेई आरू कुमार, 2000) के उपयोग करी क॑ गणना करलऽ गेलऽ जोड़ीवार दूरी मैट्रिक्स के उपयोग करी क॑ करलऽ गेलऽ छेलै ।
एल-ओर्निथिन आरू जीवाणुनाशक “रिजोलेक्स-टी” केरऽ जीवाणुरोधी गतिविधि अगर प्रसार विधि स॑ इन विट्रो म॑ निर्धारित करलऽ गेलऽ छेलै । विधि: एल-ओर्निथिन (500 मिलीग्राम/लीटर) कें स्टॉक घोल कें उचित मात्रा ल क ओकरा 10 मिलीलीटर पीडीए पोषक तत्व माध्यम सं नीक सं मिला क क्रमश: 12.5, 25, 50, 75, 100 आ 125 मिलीग्राम/लीटर कें अंतिम सांद्रता वाला घोल तैयार करूं. नियंत्रण कें रूप मे कवकनाशक “रिजोलेक्स-टी” (2, 4, 6, 8 आ 10 मिलीग्राम/लीटर) आ बाँझ आसुत जल कें पांच सांद्रता कें उपयोग कैल गेलय. माध्यम ठोस होय के बाद, स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटियोरम कल्चर केरऽ ताजा तैयार माइसेलियम प्लग, 4 मिमी व्यास के, पेट्री डिश केरऽ केंद्र म॑ स्थानांतरित करी क॑ 25±2°C प॑ संवर्धित करलऽ गेलै जब॑ तलक कि माइसेलियम पूरा नियंत्रण पेट्री डिश क॑ ढक॑ नै जाय, जेकरा बाद फंगल केरऽ वृद्धि दर्ज करलऽ गेलै । समीकरण 1 का प्रयोग करके एस.
प्रयोग कें दू बेर दोहराएल गेलय, प्रत्येक नियंत्रण/प्रयोगात्मक समूह कें लेल छह जैविक प्रतिकृति आ प्रत्येक जैविक प्रतिकृति कें लेल पांच बर्तन (प्रति बर्तन दू पौधा) कें साथ. प्रयोगात्मक परिणामक कें सटीकता, विश्वसनीयता आ पुन: प्रजनन क्षमता सुनिश्चित करय कें लेल प्रत्येक जैविक प्रतिकृति कें दू बेर (दू तकनीकी प्रतिकृति) विश्लेषण करल गेलय. एकरऽ अलावा, प्रोबिट रिग्रेशन विश्लेषण के उपयोग आधा-अधिकतम निरोधात्मक एकाग्रता (IC50) आरू IC99 (Prentice, 1976) के गणना करै लेली करलऽ गेलऽ छेलै ।
ग्रीनहाउस केरऽ परिस्थिति म॑ एल-ओर्निथिन केरऽ क्षमता के मूल्यांकन करै लेली लगातार दू बर्तन प्रयोग करलऽ गेलै । संक्षेप मे, बर्तन मे नसबंदी कैल गेल माटिक-रेत कें मिट्टी (3:1) भरल गेलय आ एस. सबसें पहलऽ एस. तखन अग्रभाग सं चारि 5 मिमी व्यास कें अगर प्लग कें लेल गेलय आ 100 ग्राम गहूम आ चावल कें चोकर कें बाँझ मिश्रण (1:1, v/v) सं टीकाकृत कैल गेलय आ सबटा फ्लास्कक कें 25 ± 2 डिग्री सेल्सियस पर 12 घंटा प्रकाश/12 घंटा अन्हार चक्र कें तहत 5 दिन तइक इन्क्यूबेट कैल गेलय ताकि स्क्लेरोटिया कें निर्माण कें उत्तेजित कैल जा सकय. सब फ्लास्क कें सामग्री कें नीक सं मिला देल गेलय ताकि माटी डालय सं पहिले एकरूपता सुनिश्चित कैल जा सकय. तखन, प्रत्येक बर्तन मे 100 ग्राम उपनिवेशीकरण चोकर मिश्रण मिला देल गेलय ताकि रोगजनक कें निरंतर सांद्रता सुनिश्चित कैल जा सकय. टीकाकृत बर्तनक कें पानि देल गेलय ताकि फंगल कें विकास कें सक्रिय कैल जा सकय आ 7 दिन तइक ग्रीनहाउस कें स्थिति मे राखल गेलय.
तखन प्रत्येक घैल मे गीजा 3 किस्मक पाँच बीज बोओल गेल । एल-ओर्निथिन आ कवकनाशक रिजोलेक्स-टी सं उपचारित बर्तनक कें लेल, नसबंदी बीज कें पहिले दूनू यौगिक कें जलीय घोल मे दू घंटा तइक भिगोएल गेलय जइ मे अंतिम आईसी99 सांद्रता क्रमशः लगभग 250 मिलीग्राम/लीटर आ 50 मिलीग्राम/लीटर छल, आ ओकर बाद बोवाई सं पहिले एक घंटा तइक हवा मे सुखायल गेलय. दोसर दिस, बीज कें नकारात्मक नियंत्रण कें रूप मे बाँझ आसुत जल मे भिजा देल गेलय. 10 दिनक बाद पहिल बेर पानि देबा स पहिने अंकुर कए पातर क देल गेल, जाहि स प्रत्येक बर्तन मे मात्र दूटा साफ-सुथरा अंकुर रहि जाइत छल। एकर अतिरिक्त, एस. नियंत्रण संयंत्रक कें समान रूप सं घायल कैल गेलय आ बराबर मात्रा (0.5 ग्राम) बाँझ, बिना उपनिवेशित चोकर मिश्रण कें घाव मे राखल गेलय आ उच्च आर्द्रता कें तहत राखल गेलय ताकि रोग कें विकास कें लेल वातावरण कें अनुकरण कैल जा सकय आ उपचार समूहक कें बीच स्थिरता सुनिश्चित कैल जा सकय.
उपचार विधि : बीन कें अंकुरक कें 500 मिलीलीटर एल-ओर्निथिन (250 मिलीग्राम/लीटर) या कवकनाशक रिजोलेक्स-टी (50 मिलीग्राम/लीटर) कें जलीय घोल सं मिट्टी कें सिंचाई सं पानी देल गेलय, तखन 10 दिन कें अंतराल पर तीन बेर उपचार दोहराएल गेलय. प्लेसबो सं उपचारित नियंत्रणक कें 500 मिलीलीटर बाँझ आसुत जल सं सिंचाई कैल गेलय. सब उपचार ग्रीनहाउस परिस्थिति (25 ± 2°C, 75 ± 1% सापेक्षिक आर्द्रता, आरू 8 घंटा प्रकाश/16 घंटा अन्हार के प्रकाश अवधि) के तहत करलऽ गेलऽ छेलै । सबटा बर्तनक कें पखवाड़ा मे पानी देल गेलय आ विशिष्ट किस्म कें लेल सिफारिशक आ निर्माता कें निर्देशक कें अनुसार 3-4 ग्राम/लीटर कें सांद्रता मे संतुलित एनपीके खाद (20-20-20, 3.6% सल्फर आ टीई सूक्ष्म तत्वक कें साथ; जैन बीज, मिस्र) सं मासिक उपचार कैल गेलय. जखन तइक अन्यथा नहि कहल गेल होय, पूर्ण रूप सं विस्तारित परिपक्व पात (ऊपर सं 2 आ 3 पत्ता) कें 72 घंटा उपचार कें बाद (एचपीटी) पर एकत्रित कैल गेलय, समरूपित कैल गेलय, पूल कैल गेलय आ आगू कें विश्लेषणक कें लेल -80 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहित कैल गेलय, जइ मे ऑक्सीडेटिव तनाव संकेतक कें इन सिटु हिस्टोकेमिकल स्थानीयकरण, लिपिड पेरोक्साइडेशन, एंजाइमी आ गैर-एन्जाइमेटिक शामिल छै, मुदा अइ तक सीमित नहि एंटीऑक्सीडेंट आ जीन अभिव्यक्ति।
सफेद फफूंदी संक्रमण तीव्रता कें आकलन टीकाकरण (डीपीआई) कें 21 दिन बाद साप्ताहिक रूप सं करल गेलय छेलै, जेकरा मे 1-9 (पूरक तालिका S2) कें पैमाना कें उपयोग करल गेलय छेलै जे टेरन एट अल द्वारा संशोधित पेट्जॉल्ट आ डिक्सन पैमाना (1996) कें आधार पर कैल गेलय छेलै. (2006)। संक्षेप मे, बीन पौधाक कें तना आ शाखाक कें जांच टीकाकरण कें बिंदु सं शुरू भ क इंटरनोड्स आ नोड्स कें साथ घावक कें प्रगति कें पालन कैल गेलय. तखन टीकाकरण कें बिंदु सं तना या शाखा कें साथ सब सं दूर बिंदु तइक घाव कें दूरी कें मापल गेलय आ घाव कें स्थान कें आधार पर 1-9 कें स्कोर देल गेलय, जतय (1) टीकाकरण कें बिंदु कें पास कोनों दृश्यमान संक्रमण कें संकेत नहि देल गेलय आ (2-9) घाव कें आकार मे क्रमिक वृद्धि आ नोड्स/इंटरनोड्स कें साथ प्रगति कें संकेत देल गेलय (पूरक तालिका S2) । तखन सूत्र 2 कें उपयोग सं सफेद फफूंदी संक्रमण कें तीव्रता कें प्रतिशत मे बदलल गेलय:
एकरऽ अलावा, रोग प्रगति वक्र (एयूडीपीसी) के तहत क्षेत्र के गणना सूत्र (शेनर आरू फिनी, 1977) के उपयोग करी क॑ करलऽ गेलऽ छेलै, जेकरा हाल ही म॑ समीकरण 3 के उपयोग करी क॑ आम बीन (चौहान आरू अन्य, 2020) के सफेद सड़न लेली अनुकूलित करलऽ गेलऽ छेलै:
जहाँ Yi = समय ti पर रोग की गंभीरता, Yi+1 = अगिला समय ti+1 पर रोग की गंभीरता, ti = प्रथम मापन का समय (दिनों में), ti+1 = अगले मापन का समय (दिनों में), n = समय बिंदु या अवलोकन बिन्दुओं की कुल संख्या | पौधाक कें ऊंचाई (सेमी), प्रति पौधा शाखाक कें संख्या, आ प्रति पौधा कें पात कें संख्या सहित बीन पौधाक कें विकास पैरामीटर कें सबटा जैविक प्रतिकृतिक मे 21 दिन तइक साप्ताहिक रूप सं दर्ज कैल गेलय.
प्रत्येक जैविक प्रतिकृति मे, उपचार कें बाद 45 दिन (अंतिम उपचार कें 15 दिन बाद) पत्ता कें नमूना (ऊपर सं दोसर आ तेसर पूर्ण रूप सं विकसित पात) एकत्र कैल गेलय. प्रत्येक जैविक प्रतिकृति मे पांच गमला (प्रति बर्तन दू पौधा) छल । कुचल ऊतक के लगभग 500 मिलीग्राम के उपयोग प्रकाश संश्लेषक पिगमेंट (क्लोरोफिल ए, क्लोरोफिल बी आरू कैरोटीनॉयड) के निष्कर्षण लेली करलऽ गेलऽ छेलै जेकरा म॑ 80% एसीटोन के उपयोग 4 डिग्री सेल्सियस प॑ अन्हार म॑ करलऽ गेलऽ छेलै । 24 घंटा के बाद नमूना क॑ अपकेंद्रित्रित करलऽ गेलऽ छेलै आरू तीन अलग-अलग तरंग दैर्ध्य प॑ अवशोषण क॑ मापी क॑ (लिक्टेनथालर, 1987) केरऽ विधि के अनुसार यूवी-160ए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (शिमाजु कॉर्पोरेशन, जापान) के उपयोग करी क॑ क्लोरोफिल ए, क्लोरोफिल बी आरू कैरोटीनॉयड सामग्री के निर्धारण लेली सुपरनेटेंट क॑ एकत्रित करलऽ गेलऽ छेलै (ए470, ए646 एवं ए663 एनएम)। अंततः प्रकाश संश्लेषण पिगमेंट केरऽ सामग्री के गणना लिक्टेनथालर (1987) द्वारा वर्णित निम्नलिखित सूत्र 4-6 के उपयोग करी क॑ करलऽ गेलऽ छेलै ।
72 घंटा बाद उपचार (hpt) पर, हाइड्रोजन पेरोक्साइड (H2O2) आरू सुपरऑक्साइड आयन (O2•−) केरऽ इन सिटु हिस्टोकेमिकल स्थानीयकरण लेली प्रत्येक जैविक प्रतिकृति स॑ पत्तियऽ (ऊपर स॑ दूसरऽ आरू तीसरा पूर्ण रूप स॑ विकसित पत्ता) एकत्रित करलऽ गेलऽ छेलै । प्रत्येक जैविक प्रतिकृति मे पांच गमला (प्रति बर्तन दू पौधा) छल । प्रत्येक जैविक प्रतिकृति कें डुप्लिकेट (दू तकनीकी प्रतिकृति) मे विश्लेषण कैल गेलय ताकि विधि कें सटीकता, विश्वसनीयता आ पुन: प्रजनन क्षमता सुनिश्चित कैल जा सकय. H2O2 आरू O2•− क॑ क्रमशः 0.1% 3,3′-डायमिनोबेन्जिडिन (DAB; सिग्मा-एल्ड्रिच, डार्मस्टैड, जर्मनी) या नाइट्रोब्लू टेट्राजोलियम (NBT; सिग्मा-एल्ड्रिच, डार्मस्टैड, जर्मनी) के उपयोग करी क॑ निर्धारित करलऽ गेलऽ छेलै, जेकरा म॑ रोमेरो-प्यूर्टस एट अल द्वारा वर्णित विधियऽ के पालन करलऽ गेलऽ छेलै । (2004) आ एडम एट अल। (1989) के साथ मामूली संशोधन के साथ। H2O2 केरऽ हिस्टोकेमिकल स्थानीयकरण लेली स्थान प॑, पत्रक क॑ 10 एमएम ट्राइस बफर (पीएच 7.8) म॑ 0.1% डीएबी स॑ वैक्यूम घुसपैठ करलऽ गेलऽ छेलै आरू ओकरा बाद कमरा केरऽ तापमान प॑ रोशनी म॑ 60 मिनट तलक इन्क्यूबेशन करलऽ गेलऽ छेलै । पत्रक कें 0.15% (v/v) टीसीए मे 4:1 (v/v) इथेनॉल:क्लोरोफॉर्म (अल-गोमहोरिया फार्मास्यूटिकल्स एंड मेडिकल सप्लाईज, काहिरा, मिस्र) मे प्रक्षालित कैल गेलय आ ओकर बाद प्रकाश मे राखल गेलय, जखन तइक ओ अन्हार नहि भ गेलय. इसी तरह, वाल्व क॑ 10 एमएम पोटेशियम फॉस्फेट बफर (पीएच 7.8) स॑ वैक्यूम घुसपैठ करलऽ गेलऽ छेलै जेकरा म॑ 0.1 w/v % HBT छेलै, जेकरा म॑ O2•− केरऽ हिस्टोकेमिकल स्थानीयकरण के लेलऽ स्थान पर छेलै । पत्रक कें कमरा कें तापमान पर रोशनी मे 20 मिनट तइक इन्क्यूबेट कैल गेलय, फेर ऊपर कें तरह ब्लीच करल गेलय, आ ओकर बाद ओकरा तब तइक रोशन करल गेलय जब तइक गहरे नीले/बैंगनी रंग कें धब्बा नहि दिखाई देल गेलय. परिणामस्वरूप भूरा (एक H2O2 सूचक के रूप म॑) या नीले-बैंगनी (एक O2•− सूचक के रूप म॑) रंग के तीव्रता के आकलन इमेज प्रोसेसिंग पैकेज ImageJ (http://fiji.sc; एक्सेस 7 मार्च 2024) के फिजी संस्करण के उपयोग करी क॑ करलऽ गेलऽ छेलै ।
मैलोनडायल्डीहाइड (एमडीए; लिपिड पेरोक्साइडेशन केरऽ मार्कर के रूप म॑) क॑ डू आरू ब्रैमलेज (1992) केरऽ विधि के अनुसार मामूली संशोधन के साथ निर्धारित करलऽ गेलऽ छेलै । प्रत्येक जैविक प्रतिकृति (ऊपर सं दोसर आ तेसर पूर्ण रूप सं विकसित पात) सं पात कें 72 घंटा उपचार कें बाद (एचपीटी) एकत्र कैल गेलय. प्रत्येक जैविक प्रतिकृति मे पांच गमला (प्रति बर्तन दू पौधा) शामिल छल । प्रत्येक जैविक प्रतिकृति कें डुप्लिकेट (दू तकनीकी प्रतिकृति) मे विश्लेषण कैल गेलय ताकि विधि कें सटीकता, विश्वसनीयता आ पुन: प्रजनन क्षमता सुनिश्चित कैल जा सकय. संक्षेप म॑, 0.5 ग्राम पीसल पत्ता ऊतक के उपयोग 20% ट्राइक्लोरोएसिटिक एसिड (टीसीए; मिलिपोरेसिग्मा, बर्लिंगटन, एमए, अमेरिका) के साथ एमडीए निष्कर्षण के लेलऽ करलऽ गेलऽ छेलै जेकरा म॑ 0.01% ब्यूटाइल हाइड्रोक्सीटोलूइन (बीएचटी; सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, अमेरिका) छेलै । तखन सुपरनेटेंट म॑ एमडीए सामग्री क॑ यूवी-160ए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (शिमाजु कॉर्पोरेशन, जापान) के उपयोग करी क॑ 532 आरू 600 एनएम प॑ अवशोषण क॑ मापी क॑ कलरमेट्रिक रूप स॑ निर्धारित करलऽ गेलऽ छेलै आरू ओकरा बाद nmol g−1 FW के रूप म॑ व्यक्त करलऽ गेलऽ छेलै ।
गैर-एंजाइमी आ एंजाइमी एंटीऑक्सीडेंट कें आकलन कें लेल, प्रत्येक जैविक प्रतिकृति सं 72 घंटा बाद उपचार (एचपीटी) पर पात (ऊपर सं दोसर आ तेसर पूर्ण रूप सं विकसित पात) एकत्र कैल गेलय. प्रत्येक जैविक प्रतिकृति मे पांच गमला (प्रति बर्तन दू पौधा) छल । प्रत्येक जैविक नमूना कें डुप्लिकेट (दू तकनीकी नमूना) मे विश्लेषण कैल गेलय. दू पात क॑ तरल नाइट्रोजन स॑ पीसलऽ गेलै आरू एकरऽ सीधा उपयोग एंजाइमी आरू गैर-एंजाइमी एंटीऑक्सीडेंट, कुल अमीनो एसिड, प्रोलाइन सामग्री, जीन अभिव्यक्ति, आरू ऑक्सालेट मात्रा निर्धारण लेली करलऽ गेलै ।
कुल घुलनशील फिनोलिक क॑ Folin-Ciocalteu अभिकर्मक (सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, अमेरिका) के उपयोग करी क॑ काहकोनेन एट अल द्वारा वर्णित विधि म॑ मामूली संशोधन के साथ निर्धारित करलऽ गेलऽ छेलै । (1999) के अनुसार। संक्षेप म॑, लगभग 0.1 ग्राम समरूप पत्ता ऊतक क॑ 20 मिलीलीटर 80% मेथनॉल स॑ अंधेरे म॑ 24 घंटा तलक निकाललऽ गेलऽ छेलै आरू अपकेंद्रित्रण के बाद सुपरनेटेंट क॑ एकत्रित करलऽ गेलऽ छेलै । नमूना अर्क कें 0.1 मिलीलीटर कें 0.5 मिलीलीटर फोलिन-सियोकैल्ट्यू अभिकर्मक (10%) सं मिला क 30 s तइक हिला देल गेलय आ 5 मिनट तइक अन्हार मे छोड़ल गेलय. तखन प्रत्येक ट्यूब मे 0.5 मिलीलीटर 20% सोडियम कार्बोनेट घोल (Na2CO3; अल-गोमहोरिया फार्मास्यूटिकल्स एंड मेडिकल सप्लाईज कंपनी, काहिरा, मिस्र) मिलाओल गेल, नीक सं मिलाओल गेल आ कमराक तापमान पर अन्हार मे 1 घंटा धरि इन्क्यूबेट कएल गेल. ऊष्मायन के बाद, प्रतिक्रिया मिश्रण के अवशोषण क॑ 765 एनएम प॑ यूवी-160ए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (शिमाजु कॉर्पोरेशन, जापान) के उपयोग करी क॑ मापलऽ गेलऽ छेलै । नमूना अर्क म॑ कुल घुलनशील फिनोल केरऽ सांद्रता गैलिक एसिड अंशांकन वक्र (फिशर साइंटिफिक, हैम्पटन, एनएच, अमेरिका) के उपयोग करी क॑ निर्धारित करलऽ गेलऽ छेलै आरू प्रति ग्राम ताजा वजन (मिलीग्राम जीएई जी-1 ताजा वजन) गैलिक एसिड समकक्ष मिलीग्राम के रूप म॑ व्यक्त करलऽ गेलऽ छेलै ।
कुल घुलनशील फ्लेवोनोइड सामग्री Djeridane एट अल के विधि के अनुसार निर्धारित करलऽ गेलऽ छेलै । (2006) के मामूली संशोधन के साथ। संक्षेप म॑, उपरोक्त मेथनॉल अर्क केरऽ 0.3 मिलीलीटर क॑ 0.3 मिलीलीटर 5% एल्यूमीनियम क्लोराइड घोल (AlCl3; फिशर साइंटिफिक, हैम्पटन, एनएच, अमेरिका) स॑ मिला क॑ जोर स॑ हिलायलऽ गेलै आरू ओकरा बाद कमरा केरऽ तापमान प॑ 5 मिनट तलक इन्क्यूबेशन करलऽ गेलै, जेकरा बाद 0.3 मिलीलीटर 10% पोटेशियम एसीटेट घोल (Al-Gomhoria) मिलालऽ गेलै दवा आ चिकित्सा आपूर्ति, काहिरा, मिस्र), नीक सं मिला क कमरा कें तापमान पर 30 मिनट तइक अंधेरे मे इन्क्यूबेट कैल गेलय. ऊष्मायन के बाद, प्रतिक्रिया मिश्रण केरऽ अवशोषण क॑ यूवी-160ए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (शिमाजु कॉर्पोरेशन, जापान) के उपयोग करी क॑ 430 एनएम प॑ मापलऽ गेलऽ छेलै । नमूना अर्क म॑ कुल घुलनशील फ्लेवोनोइड केरऽ सांद्रता क॑ रूटिन अंशांकन वक्र (टीसीआई अमेरिका, पोर्टलैंड, ओआर, अमेरिका) के उपयोग करी क॑ निर्धारित करलऽ गेलऽ छेलै आरू ओकरा बाद ताजा वजन (मिलीग्राम आरई जी-1 ताजा वजन) के प्रति ग्राम रूटिन समतुल्य मिलीग्राम के रूप म॑ व्यक्त करलऽ गेलऽ छेलै ।
बीन केरऽ पत्ता केरऽ कुल मुक्त अमीनो एसिड सामग्री क॑ योकोयामा आरू हिरामात्सु (2003) द्वारा प्रस्तावित विधि के आधार प॑ संशोधित निनहाइड्रिन अभिकर्मक (थर्मो साइंटिफिक केमिकल, वाल्थम, एमए, अमेरिका) के उपयोग करी क॑ निर्धारित करलऽ गेलऽ छेलै आरू सन एट अल द्वारा संशोधित करलऽ गेलऽ छेलै । (2006)। संक्षेप म॑, 0.1 ग्राम पिसल ऊतक क॑ पीएच 5.4 बफर स॑ निकाललऽ गेलऽ छेलै, आरू 200 μL सुपरनेटेंट क॑ 200 μL निनहाइड्रीन (2%) आरू 200 μL पाइरिडीन (10%; स्पेक्ट्रम केमिकल, न्यू ब्रंसविक, एनजे, अमेरिका) के साथ प्रतिक्रिया करलऽ गेलऽ छेलै, जेकरा क॑ उबलते पानी के स्नान म॑ 30 मिनट तलक इन्क्यूबेशन करलऽ गेलऽ छेलै, ओकरा बाद ठंडा करलऽ गेलऽ छेलै आरू ओकरा पर मापलऽ गेलऽ छेलै 580 एनएम एक यूवी-160ए स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (शिमाजु कॉर्पोरेशन, जापान) के उपयोग स॑ । दोसरऽ तरफ प्रोलाइन केरऽ निर्धारण बेट्स विधि स॑ करलऽ गेलऽ छेलै (बेट्स एट अल., १९७३) । प्रोलाइन क॑ 3% सल्फोसैलिसिलिक एसिड (थर्मो साइंटिफिक केमिकल, वाल्थम, एमए, अमेरिका) स॑ निकाललऽ गेलऽ छेलै आरू अपकेंद्रित्रण के बाद 0.5 मिलीलीटर सुपरनेटेंट क॑ 1 मिलीलीटर ग्लेशियल एसिटिक एसिड (फिशर साइंटिफिक, हैम्पटन, एनएच, अमेरिका) आरू निनहाइड्रीन अभिकर्मक स॑ मिला क॑ 90 डिग्री सेल्सियस प॑ 45 मिनट तलक इन्क्यूबेशन करलऽ गेलऽ छेलै, ठंडा करी क॑ ओकरा प॑ मापलऽ गेलऽ छेलै 520 एनएम पर उपरोक्त समान स्पेक्ट्रोफोटोमीटर के प्रयोग | पत्ता के अर्क म॑ कुल मुक्त अमीनो एसिड आरू प्रोलाइन क॑ क्रमशः ग्लाइसिन आरू प्रोलाइन अंशांकन वक्र (सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, अमेरिका) के उपयोग करी क॑ निर्धारित करलऽ गेलऽ छेलै आरू ओकरा मिलीग्राम/जी ताजा वजन के रूप म॑ व्यक्त करलऽ गेलऽ छेलै ।
एंटीऑक्सीडेंट एंजाइम केरऽ एंजाइमी गतिविधि क॑ निर्धारित करै लेली लगभग 500 मिलीग्राम समरूप ऊतक क॑ 3 मिलीलीटर 50 एमएम ट्राइस बफर (पीएच 7.8) स॑ निकाललऽ गेलऽ छेलै जेकरा म॑ 1 एमएम ईडीटीए-Na2 (सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, अमेरिका) आरू 7.5% पॉलीविनाइलपाइरोलिडोन (पीवीपी; सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, अमेरिका), प्रशीतन (4 डिग्री सेल्सियस) के तहत 20 मिनट के लेल 10,000 × g पर अपकेंद्रित्रित करलऽ गेलऽ छेलै, आरू सुपरनेटेंट (कच्चा एंजाइम अर्क) क॑ एकत्रित करलऽ गेलऽ छेलै (एल-नगर एट अल., 2023; उस्मान एट अल., 2023) । तखन कैटालेज (CAT) क॑ 2 मिलीलीटर 0.1 एम सोडियम फॉस्फेट बफर (पीएच 6.5; सिग्मा-एल्ड्रिच, सेंट लुइस, एमओ, अमेरिका) आरू 100 μl 269 एमएम H2O2 घोल स॑ प्रतिक्रिया करी क॑ एबी (1984) केरऽ विधि के अनुसार एकरऽ एंजाइमी गतिविधि क॑ निर्धारित करलऽ गेलै आरू मामूली संशोधन (एल-नागर एट अल., 2023; उस्मान एट अल।, 2023)। गुआयकोल-निर्भर पेरोक्साइडेज (पीओएक्स) एंजाइमी गतिविधि क॑ हर्राच एट अल केरऽ विधि के उपयोग करी क॑ निर्धारित करलऽ गेलऽ छेलै । (2009)। (2008) के साथ मामूली संशोधन (एल-नगर एट अल., 2023; उस्मान एट अल., 2023) आरू पॉलीफेनोल ऑक्सीडेज (पीपीओ) के एंजाइमी गतिविधि क॑ 100 एमएम सोडियम फॉस्फेट बफर (पीएच 6.0) के 2.2 मिलीलीटर, 100 μl गुआयकोल (टीसीआई रसायन, पोर्टलैंड, ओआर, 2023) के साथ प्रतिक्रिया के बाद निर्धारित करलऽ गेलऽ छेलै । अमेरिका) आ 12 मिमी H2O2 के 100 μl। विधि क॑ (एल-नगर आरू अन्य, 2023; उस्मान आरू अन्य, 2023) स॑ कुछ संशोधित करलऽ गेलऽ छेलै । परख 0.1 एम फॉस्फेट बफर (पीएच 6.0) म॑ ताजा तैयार करलऽ गेलऽ 3 मिलीलीटर कैटेकोल घोल (थर्मो साइंटिफिक केमिकल, वाल्थम, एमए, अमेरिका) (0.01 एम) के साथ प्रतिक्रिया के बाद करलऽ गेलऽ छेलै । CAT गतिविधि क॑ 240 एनएम (A240) प॑ H2O2 केरऽ अपघटन के निगरानी करी क॑ मापलऽ गेलऽ छेलै, POX गतिविधि क॑ 436 एनएम (A436) प॑ अवशोषण म॑ वृद्धि के निगरानी करी क॑ मापलऽ गेलऽ छेलै, आरू PPO गतिविधि क॑ UV-160A के उपयोग करी क॑ हर 30 s प॑ 3 मिनट तलक 495 एनएम (A495) प॑ अवशोषण के उतार-चढ़ाव रिकॉर्ड करी क॑ मापलऽ गेलऽ छेलै स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (शिमाजु, जापान)।
रियल-टाइम आरटी-पीसीआर के उपयोग तीन एंटीऑक्सीडेंट संबंधित जीन के ट्रांसक्रिप्ट स्तर के पता लगाबै लेली करलऽ गेलऽ छेलै, जेकरा म॑ पेरोक्सिसोमल कैटालेज (PvCAT1; GenBank Accession No. KF033307.1), सुपरऑक्साइड डिस्मुटेज (PvSOD; GenBank Accession No. XM_068639556.1), आरू ग्लूटाथियोन रिडक्टेज (PvGR; GenBank Accession No. KY195009.1), बीन कें पात मे (ऊपर सं दोसर आ तेसर पूर्ण रूप सं विकसित पात) अंतिम उपचार कें 72 घंटा बाद. संक्षेप म॑ कहलऽ जाय त॑ निर्माता केरऽ प्रोटोकॉल के अनुसार सिम्पली पी टोटल आरएनए एक्सट्रैक्शन किट (कैट. नंबर बीएससी५२एस१; बायोफ्लक्स, बायोरी टेक्नोलॉजी, चीन) के उपयोग करी क॑ आरएनए क॑ अलग करलऽ गेलऽ छेलै । तखन, निर्माता केरऽ निर्देश के अनुसार TOP scriptTM cDNA Synthesis Kit के उपयोग करी क॑ cDNA के संश्लेषण करलऽ गेलऽ छेलै । उपरोक्त तीन जीन कें प्राइमर अनुक्रम पूरक तालिका S3 मे सूचीबद्ध छै. PvActin-3 (GenBank accession number: XM_068616709.1) क॑ हाउसकीपिंग जीन के रूप म॑ प्रयोग करलऽ गेलऽ छेलै आरू सापेक्षिक जीन अभिव्यक्ति के गणना 2-ΔΔCT विधि (Livak and Schmittgen, 2001) के उपयोग करी क॑ करलऽ गेलऽ छेलै । जैविक तनाव (सामान्य फलियां आरू एंथ्राक्नोज कवक कोलेटोट्रिकम लिंडेमुथियनम के बीच असंगत अंतःक्रिया) आरू अजैविक तनाव (सूखा, लवणता, कम तापमान) के तहत एक्टिन स्थिरता के प्रदर्शन करलऽ गेलऽ छेलै (बोर्जेस एट अल., 2012) ।
हमनें शुरू म॑ प्रोटीन-प्रोटीन ब्लास्ट टूल (BLASTp 2.15.0+) (Altschul et al., 1997, 2005) के उपयोग करी क॑ एस. संक्षेप म॑, हमन॑ एस्परजिलस फिजिएंसिस सीबीएस 313.89 (AfOAH; टैक्साइड: 1191702; जेनबैंक एक्सेसन नंबर XP_040799428.1; 342 अमीनो एसिड) आरू पेनिसिलियम लैजेना (PlOAH; टैक्साइड: 94218; जेनबैंक एक्सेसन नंबर) स॑ OAH के प्रयोग करलकै XP_056833920.1;316 अमीनो एसिड) क॑ क्वेरी अनुक्रम के रूप म॑ एस. BLASTp क॑ नेशनल सेंटर फॉर बायोटेक्नोलॉजी इन्फॉर्मेशन (एनसीबीआई) केरऽ वेबसाइट, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/ प॑ जेनबैंक म॑ सबसें हाल म॑ उपलब्ध एस.
एकरऽ अलावा, एस अल., 1992)। वंशानुगत वृक्ष क॑ एस. 2007 मे भेल। एकरऽ अलावा, एस. https://espript.ibcp.fr/ESPript/ESPript/सूचकांक.php)।
अत: एस. अंततः, अनुमानित एस SWISS-MODEL सर्वर (https://swissmodel.expasy.org/) (बियासिनी एट अल., 2014) क॑ । अनुमानित तीन आयामी संरचना (पीडीबी प्रारूप) क॑ यूसीएसएफ-काइमेरा पैकेज (संस्करण 1.15; https://www.cgl.ucsf.edu/chimera/ ) (पेटरसन एट अल., 2004) के उपयोग करी क॑ इंटरैक्टिव रूप स॑ दृश्यमान करलऽ गेलऽ छेलै ।
स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम केरऽ माइसेलियम म॑ ऑक्सालोएसिटेट एसिटाइलहाइड्रोलेज (SsOAH; GenBank accession number: XM_001590428.1) केरऽ ट्रांसक्रिप्शनल स्तर निर्धारित करै लेली मात्रात्मक वास्तविक समय प्रतिदीप्ति पीसीआर के उपयोग करलऽ गेलऽ छेलै । संक्षेप म॑, एस. तत्पश्चात, कोशिका क॑ एल-ओर्निथिन आरू कवकनाशक रिजोलेक्स-टी स॑ अंतिम आईसी50 सांद्रता (क्रमशः लगभग 40 आरू 3.2 मिलीग्राम/लीटर) प॑ उपचारित करलऽ गेलऽ छेलै आरू ओकरा बाद वू ही परिस्थिति म॑ 24 घंटा आरू संवर्धित करलऽ गेलऽ छेलै । ऊष्मायन के बाद संस्कृतियऽ क॑ 2500 आरपीएम प॑ 5 मिनट तलक अपकेंद्रित्रित करलऽ गेलऽ छेलै आरू सुपरनेटेंट (फंगल माइसेलियम) क॑ जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण लेली एकत्रित करलऽ गेलऽ छेलै । तहिना संक्रमण के 0, 24, 48, 72, 96, आ 120 घंटा बाद संक्रमित पौधा सं फंगल माइसेलियम एकत्रित कैल गेल छल जे संक्रमित ऊतक के सतह पर सफेद फफूंदी आ कपास के माइसेलियम बनल छल. फंगल माइसेलियम स॑ आरएनए निकाललऽ गेलऽ छेलै आरू ओकरा बाद ऊपर वर्णित तरीका स॑ सीडीएनए के संश्लेषण करलऽ गेलऽ छेलै । SsOAH कें लेल प्राइमर अनुक्रम पूरक तालिका S3 मे सूचीबद्ध छै. SsActin (GenBank accession number: XM_001589919.1) क॑ हाउसकीपिंग जीन के रूप म॑ प्रयोग करलऽ गेलऽ छेलै, आरू सापेक्षिक जीन अभिव्यक्ति के गणना 2-ΔΔCT विधि (Livak आरू Schmittgen, 2001) के उपयोग करी क॑ करलऽ गेलऽ छेलै ।
आलू डेक्स्ट्रोज शोरबा (पीडीबी) आरू पौधा के नमूना म॑ जू आरू झांग (2000) केरऽ विधि के अनुसार मामूली संशोधन के साथ ऑक्सालिक एसिड निर्धारित करलऽ गेलऽ छेलै । संक्षेप म॑, एस. ऊष्मायन के बाद फंगल कल्चर क॑ सबसें पहल॑ व्हाटमैन #1 फिल्टर पेपर स॑ छानलऽ गेलै आरू ओकरा बाद 2500 आरपीएम प॑ 5 मिनट तलक अपकेंद्रित्रित करलऽ गेलै ताकि अवशिष्ट माइसेलियम क॑ हटाय देलऽ जाय सक॑ । सुपरनेटेंट क॑ एकत्रित करी क॑ ऑक्सालेट केरऽ आरू मात्रात्मक निर्धारण लेली 4°C प॑ संग्रहित करलऽ गेलऽ छेलै । पौधाक कें नमूना तैयार करय कें लेल लगभग 0.1 ग्राम पौधाक कें ऊतकक कें टुकड़ा आसुत जल (हर बेर 2 मिलीलीटर) सं तीन बेर निकालल गेलय. तखन नमूनाक कें 2500 आरपीएम पर 5 मिनट तइक अपकेंद्रित्रित कैल गेलय, सुपरनेटेंट कें व्हाटमैन नंबर 1 फिल्टर पेपर कें माध्यम सं सूखा छानल गेलय आ आगू कें विश्लेषण कें लेल एकत्र कैल गेलय.
ऑक्सालिक एसिड केरऽ मात्रात्मक विश्लेषण लेली, प्रतिक्रिया मिश्रण क॑ ग्लास स्टॉपर ट्यूब म॑ निम्नलिखित क्रम म॑ तैयार करलऽ गेलऽ छेलै: 0.2 मिलीलीटर नमूना (या पीडीबी कल्चर छाननी या ऑक्सालिक एसिड मानक घोल), 0.11 मिलीलीटर ब्रोमोफिनोल ब्लू (बीपीबी, 1 एमएम; फिशर केमिकल, पिट्सबर्ग, पीए, अमेरिका), 0.198 मिलीलीटर 1 एम सल्फ्यूरिक एसिड (H2SO4; अल-गोमहोरिया फार्मास्यूटिकल्स एंड मेडिकल सप्लाईज, काहिरा, मिस्र) आरू 0.176 मिलीलीटर 100 एमएम पोटेशियम डाइक्रोमेट (K2Cr2O7; TCI केमिकल, पोर्टलैंड, ओआर, अमेरिका), आरू ओकरा बाद घोल क॑ आसुत पानी स॑ 4.8 मिलीलीटर तलक पतला करी क॑ जोरदार ढंग स॑ मिला क॑ तुरंत 60 डिग्री सेल्सियस पानी म॑ रखलऽ गेलै स्नान। 10 मिनट के बाद 0.5 मिलीलीटर सोडियम हाइड्रॉक्साइड घोल (NaOH; 0.75 M) मिलाकर प्रतिक्रिया बंद कर दिया | प्रतिक्रिया मिश्रण केरऽ अवशोषण (A600) क॑ यूवी-160 स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (शिमाजु कॉर्पोरेशन, जापान) के उपयोग करी क॑ 600 एनएम प॑ मापलऽ गेलऽ छेलै । पीडीबी आ आसुत जल कें उपयोग क्रमशः कल्चर फिल्टर आ पौधाक कें नमूनाक कें मात्रा निर्धारण कें लेल नियंत्रण कें रूप मे कैल गेलय. संस्कृति छानने वाला पदार्थों म॑ ऑक्सालिक एसिड केरऽ सांद्रता, जेकरा पीडीबी माध्यम (μg.mL−1) के प्रति मिलीलीटर ऑक्सालिक एसिड के माइक्रोग्राम के रूप म॑ व्यक्त करलऽ गेलऽ छेलै, आरू पत्ता के अर्क म॑, जे ऑक्सालिक एसिड के माइक्रोग्राम प्रति ग्राम ताजा वजन (μg.g−1 FW) के रूप म॑ व्यक्त करलऽ गेलऽ छेलै, क॑ एक ऑक्सालिक एसिड अंशांकन वक्र (थर्मो फिशर साइंटिफिक केमिकल्स, वाल्थम, एमए, 100) के उपयोग करी क॑ निर्धारित करलऽ गेलऽ छेलै । अमेरिका)।
पूरा अध्ययन मे, सबटा प्रयोगक कें डिजाइन पूर्ण रूप सं यादृच्छिक डिजाइन (सीआरडी) मे कैल गेलय छल जइ मे प्रति उपचार छह जैविक प्रतिकृति आ पांच बर्तन प्रति जैविक प्रतिकृति (दू पौधा प्रति बर्तन) छल जखन तइक अन्यथा नहि कहल गेल होय. जैविक प्रतिकृतिक कें विश्लेषण डुप्लिकेट (दू तकनीकी प्रतिकृति) मे कैल गेलय. तकनीकी प्रतिकृति के उपयोग वही प्रयोग के पुनरुत्पादन क्षमता के जांच करै लेली करलौ गेलौ छेलै लेकिन फर्जी प्रतिकृति स॑ बचै लेली सांख्यिकीय विश्लेषण म॑ एकरऽ उपयोग नै करलऽ गेलऽ छेलै । डेटा क॑ सांख्यिकीय रूप स॑ विश्लेषण विचरण के विश्लेषण (एनोवा) के उपयोग करी क॑ करलऽ गेलऽ छेलै आरू ओकरऽ बाद ट्यूकी-क्रामर ईमानदारी स॑ महत्वपूर्ण अंतर (एचएसडी) परीक्षण (पी ≤ 0.05) करलऽ गेलऽ छेलै । इन विट्रो प्रयोग के लेलऽ प्रोबिट मॉडल के उपयोग करी क॑ आईसी५० आरू आईसी९९ मान के गणना करलऽ गेलऽ छेलै आरू ९५% विश्वास अंतराल के गणना करलऽ गेलऽ छेलै ।
मिस्र केरऽ एल गबिया गवर्नमेंट म॑ अलग-अलग सोयाबीन खेतऽ स॑ कुल चार आइसोलेट एकत्रित करलऽ गेलऽ छेलै । पीडीए माध्यम पर सब आइसोलेट मलाईदार सफेद माइसेलियम पैदा करलकै जे जल्दी स॑ कपास जैसनऽ सफेद होय गेलै (चित्र 1A) आरू ओकरा बाद स्क्लेरोटियम केरऽ अवस्था म॑ बेज या भूरा रंग के होय गेलै । स्क्लेरोटिया आमतौर पर घना, कारी, गोलाकार या अनियमित आकार, 5.2 सं 7.7 मिमी लंबा आ 3.4 सं 5.3 मिमी व्यास कें होयत छै (चित्र 1B) । यद्यपि चारि आइसोलेट न॑ 25 ± 2 डिग्री सेल्सियस (चित्र 1A) प॑ 10-12 दिन के ऊष्मायन के बाद कल्चर मीडियम केरऽ किनारे प॑ स्क्लेरोटिया केरऽ सीमांत पैटर्न विकसित करलकै, लेकिन ओकरा म॑ प्रति प्लेट स्क्लेरोटिया केरऽ संख्या काफी अलग छेलै (पी < 0.001), जेकरा म॑ आइसोलेट 3 म॑ सबस॑ अधिक स्क्लेरोटिया (32.33 ± 1.53 स्क्लेरोटिया प्रति) छेलै प्लेट; इसी तरह, आइसोलेट #3 न॑ पीडीबी म॑ अन्य आइसोलेट (3.33 ± 0.49 μg.mL−1; चित्र 1D) के तुलना म॑ अधिक ऑक्सालिक एसिड पैदा करलकै । आइसोलेट #3 न॑ फाइटोपैथोजेनिक कवक स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम केरऽ विशिष्ट आकृति विज्ञान आरू सूक्ष्म विशेषता देखैलकै । उदाहरण के लेल, पीडीए पर, आइसोलेट #3 के कॉलोनी तेजी सं बढ़ल, मलाईदार सफेद (चित्र 1A), रिवर्स बेज या हल्का सामन पीला-भूरा रंग के छल, आ 9 सेमी व्यास के प्लेट के सतह के पूरा तरह सं ढकय लेल 25 ± 2°C पर 6-7 दिन के आवश्यकता छल. उपरोक्त आकृति विज्ञान आरू सूक्ष्म विशेषता के आधार प॑ आइसोलेट #3 क॑ स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम के रूप म॑ पहचानलऽ गेलऽ छेलै ।
चित्र 1. आम फलियां फसलक सं अलग कैल गेल एस. (A) पीडीए माध्यम पर चारि एस स्क्लेरोटियोरम आइसोलेट कें माइसेलियम वृद्धि, (B) चारि एस स्क्लेरोटियोरम आइसोलेट कें स्क्लेरोटिया, (C) स्क्लेरोटिया कें संख्या (प्रति प्लेट), (D) पीडीबी माध्यम पर ऑक्सालिक एसिड स्राव (μg.mL−1), आ (ई) संवेदनशील व्यावसायिक फलियां पर चारि एस स्क्लेरोटियोरम आइसोलेट कें रोग कें गंभीरता (%) ग्रीनहाउस परिस्थिति मे गिजा 3 कल्टीवर। मान पांच जैविक प्रतिकृति (n = 5) कें औसत ± एसडी कें प्रतिनिधित्व करय छै. विभिन्न अक्षर उपचारक कें बीच सांख्यिकीय रूप सं महत्वपूर्ण अंतर कें संकेत करएयत छै (p < 0.05)। (F–H) विशिष्ट सफेद फफूंदी के लक्षण क्रमशः जमीन के ऊपर के तने आरू सिलिक पर, आइसोलेट #3 (dpi) के साथ टीकाकरण के 10 दिन बाद दिखाई देलऽ गेलऽ छेलै । (I) एस. क्लस्टरिंग लाइनक कें ऊपर कें संख्या क्षेत्र कवरेज (%) कें संकेत करयत छै, आ क्लस्टरिंग लाइनक कें नीचा कें संख्या शाखाक कें लंबाई कें संकेत करयत छै.
अत: रोगजनकता कें पुष्टि करय कें लेल, ग्रीनहाउस परिस्थितिक मे संवेदनशील वाणिज्यिक बीन प्रजाति गीजा 3 कें टीकाकरण कें लेल चारि प्राप्त एस. यद्यपि प्राप्त सबटा फंगल आइसोलेट रोगजनक छल आ हरी बीन (cv. Giza 3) कें संक्रमित कयर सकय छै, जेकरा सं टीकाकरण कें 10 दिन बाद (dpi) जमीन सं ऊपर कें सब भागक (चित्र 1F), विशेष रूप सं तने (चित्र 1G) आ फली (चित्र 1H) पर विशिष्ट सफेद फफूंदी कें लक्षण पैदा भ सकय छै, आइसोलेट 3 दू स्वतंत्र प्रयोगक मे सब सं आक्रामक आइसोलेट छल. आइसोलेट 3 मे बीन पौधाक पर सब सं बेसि बीमारी कें गंभीरता (%) छल (क्रमशः 7, 14, आ 21 दिन संक्रमण कें बाद 24.0 ± 4.0, 58.0 ± 2.0, आ 76.7 ± 3.1; चित्र 1F)।
सबसे आक्रामक एस स्क्लेरोटियोरम आइसोलेट #3 केरऽ पहचान क॑ आरू पुष्टि आंतरिक प्रतिलिपिबद्ध स्पेसर (आईटीएस) अनुक्रमण (चित्र 1I) के आधार प॑ करलऽ गेलऽ छेलै । आइसोलेट #3 आ 20 संदर्भ आइसोलेट/उपभेदक कें बीच वंशानुगत विश्लेषण मे ओकर बीच उच्च समानता (>99%) देखल गेलय. ध्यान देबऽ के बात छै कि एस OR206374.1; नबका अनुक्रम क॑ एनसीबीआई डाटाबेस म॑ जमा करलऽ गेलऽ छै आरू एकरऽ नाम “स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटियोरम – आइसोलेट वाईएन-२५” (जेनबैंक एक्सेसन नंबर पीवी२०२७९२) रखलऽ गेलऽ छै । देखल जा सकैत अछि जे आइसोलेट 3 सबसँ बेसी आक्रामक आइसोलेट अछि; अतः बाद केरऽ सब प्रयोगऽ म॑ अध्ययन लेली ई आइसोलेट क॑ चुनलऽ गेलऽ छेलै ।
एस. उल्लेखनीय छै कि एल-ओर्निथिन न॑ जीवाणुरोधी प्रभाव डाललकै आरू धीरे-धीरे खुराक-निर्भर तरीका स॑ एस. परीक्षण करलौ गेलौ उच्चतम सांद्रता (125 मिलीग्राम/लीटर) प, एल-ओर्निथिन नँ सबसें अधिक माइसेलियम विकास निरोध दर (99.62 ± 0.27%; चित्र 2 बी) प्रदर्शित करलकै, जे परीक्षण करलौ गेलौ उच्चतम सांद्रता (10 मिलीग्राम/लीटर) प वाणिज्यिक कवकनाशक रिजोलेक्स-टी (निरोध दर 99.45 ± 0.39%; चित्र 2C) के बराबर छेलै, जे समान संकेत दै छै प्रभावकारिता के।
चित्र 2. स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटिओरम के विरुद्ध एल-ओर्निथिन के इन विट्रो जीवाणुरोधी गतिविधि | (A) वाणिज्यिक कवकनाशक रिजोलेक्स-टी (10 मिलीग्राम/लीटर) के साथ एस स्क्लेरोटियोरम के विरुद्ध एल-ओर्निथिन के विभिन्न सांद्रता के जीवाणुरोधी गतिविधि की तुलना | (बी, सी) क्रमशः एल-ओर्निथिन (12.5, 25, 50, 75, 100 आरू 125 मिलीग्राम/लीटर) या रिजोलेक्स-टी (2, 4, 6, 8 आरू 10 मिलीग्राम/लीटर) के विभिन्न सांद्रता के साथ उपचार के बाद एस. मान पांच जैविक प्रतिकृति (n = 5) कें औसत ± एसडी कें प्रतिनिधित्व करय छै. अलग-अलग अक्षर उपचारक कें बीच सांख्यिकीय अंतर कें दर्शाबय छै (p < 0.05)। (डी, ई) क्रमशः एल-ओर्निथिन एवं वाणिज्यिक कवकनाशक रिजोलेक्स-टी के प्रोबिट मॉडल प्रतिगमन विश्लेषण | प्रोबिट मॉडल रिग्रेशन रेखा क॑ ठोस नीली रेखा के रूप म॑ दिखालऽ गेलऽ छै, आरू विश्वास अंतराल (95%) क॑ डैश लाल रेखा के रूप म॑ दिखालऽ गेलऽ छै ।
एकरऽ अलावा प्रोबिट रिग्रेशन विश्लेषण करलऽ गेलऽ छेलै आरू संबंधित प्लॉट तालिका 1 आरू चित्र 2D,E म॑ दिखालऽ गेलऽ छै । संक्षेप म॑, एल-ओर्निथिन केरऽ स्वीकार्य ढलान मान (y = 2.92x − 4.67) आरू संबद्ध महत्वपूर्ण आँकड़ा (Cox & Snell R2 = 0.3709, Nagelkerke R2 = 0.4998 आरू p < 0.0001; चित्र 2D) न॑ वाणिज्यिक कवकनाशक के तुलना म॑ एस रिजोलेक्स-टी (y = 1.96x − 0.99, कॉक्स एंड स्नेल आर 2 = 0.1242, नागेलकेर्के आर 2 = 0.1708 और पी <0.0001) (तालिका 1)।
तालिका 1. एस.
कुल मिलाकय, एल-ओर्निथिन (250 मिलीग्राम/लीटर) सं उपचारित आम बीन पौधाक पर सफेद फफूंदी कें विकास आ गंभीरता मे काफी कमी आयल छै, जे अनुपचारित एस. संक्षेप मे, यद्यपि अनुपचारित संक्रमित नियंत्रण पौधाक कें रोग कें गंभीरता धीरे-धीरे बढ़ल (52.67 ± 1.53, 83.21 ± 2.61, आ 92.33 ± 3.06%), एल-ओर्निथिन सं पूरा प्रयोग मे रोग कें गंभीरता (%) मे काफी कमी आयल (8.97 ± 0.15, 18.00 ± 1.00, आ 26.36 ± 3.07) क्रमशः 7, 14, आ 21 दिनक बाद उपचार (डीपीटी) पर (चित्र 3 ए)। तहिना जखन एस रिजोलेक्स-टी कवकनाशक (183.61 ± 7.71; चित्र 3 बी)। दोसर प्रयोग मे सेहो इएह प्रवृत्ति देखल गेल।
चित्र 3. ग्रीनहाउस परिस्थिति मे स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटियोरम कें कारण आम बीन कें सफेद सड़न कें विकास पर एल-ओर्निथिन कें बहिर्जात अनुप्रयोग कें प्रभाव. (A) 250 मिलीग्राम/लीटर एल-ओर्निथिन के साथ उपचार के बाद आम बीन के सफेद फफूंदी के रोग प्रगति वक्र | (B) एल-ओर्निथिन सं उपचार कें बाद आम बीन कें सफेद फफूंदी कें रोग प्रगति वक्र (AUDPC) कें तहत क्षेत्र. मान पांच जैविक प्रतिकृति (n = 5) कें औसत ± एसडी कें प्रतिनिधित्व करय छै. अलग-अलग अक्षर उपचारक कें बीच सांख्यिकीय रूप सं महत्वपूर्ण अंतर कें दर्शाबय छै (p < 0.05)।
250 मिलीग्राम/लीटर एल-ओर्निथिन कें बहिर्जात प्रयोग सं 42 दिन कें बाद धीरे-धीरे पौधाक कें ऊंचाई (चित्र 4 ए), प्रति पौधा शाखाक कें संख्या (चित्र 4 बी), आ प्रति पौधा पात कें संख्या (चित्र 4 सी) मे वृद्धि भेलय. जखन कि वाणिज्यिक कवकनाशक रिजोलेक्स-टी (50 मिलीग्राम/लीटर) कें अध्ययन कैल गेलय सब पोषण पैरामीटरक पर सब सं बेसि प्रभाव पड़ल, 250 मिलीग्राम/लीटर एल-ओर्निथिन कें बहिर्जात आवेदन कें बिना उपचारित नियंत्रणक कें तुलना मे दोसर सब सं बेसि प्रभाव पड़ल (चित्र 4 ए-सी) । दोसरऽ तरफ, एल-ओर्निथिन उपचार न॑ प्रकाश संश्लेषण पिगमेंट क्लोरोफिल ए (चित्र 4D) आरू क्लोरोफिल बी (चित्र 4E) के सामग्री प॑ कोनों महत्वपूर्ण प्रभाव नै डाललकै, लेकिन नकारात्मक नियंत्रण (0.44 ± 0.02 मिलीग्राम/जी fr wt) आरू के तुलना म॑ कुल कैरोटीनॉयड सामग्री (0.56 ± 0.03 मिलीग्राम/जी fr wt) म॑ कुछ वृद्धि करलकै सकारात्मक नियंत्रण (0.46 ± 0.02 मिलीग्राम / जी fr wt; चित्रा 4F)। कुल मिला क॑ ई परिणाम संकेत करै छै कि एल-ओर्निथिन उपचारित फलियां लेली फाइटोटोक्सिक नै छै आरू एकरऽ विकास क॑ भी उत्तेजित करी सकै छै ।
चित्र 4. ग्रीनहाउस परिस्थितिक मे स्क्लेरोटिनिया स्क्लेरोटियोरम सं संक्रमित बीन कें पत्ताक कें विकास विशेषताक आ प्रकाश संश्लेषणात्मक पिगमेंट पर बहिर्जात एल-ओर्निथिन आवेदन कें प्रभाव. (A) पौधे की ऊंचाई (सेमी), (B) प्रति पौधे शाखाओं की संख्या, (C) प्रति पौधे पत्ते की संख्या, (D) क्लोरोफिल ए सामग्री (mg g-1 fr wt), (E) क्लोरोफिल बी सामग्री (mg g-1 fr wt), (F) कुल कैरोटीनॉयड सामग्री (mg g-1 fr wt) | मान पांच जैविक प्रतिकृति (n = 5) कें औसत ± एसडी छै. अलग-अलग अक्षर उपचारक कें बीच सांख्यिकीय रूप सं महत्वपूर्ण अंतर कें संकेत करय छै (p < 0.05)।
प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजाति (ROS; हाइड्रोजन पेरोक्साइड [H2O2] के रूप म॑ व्यक्त) आरू मुक्त कण (सुपरऑक्साइड आयन [O2•−] के रूप म॑ व्यक्त) केरऽ इन सिटु हिस्टोकेमिकल स्थानीयकरण स॑ पता चललै कि एल-ओर्निथिन (250 मिलीग्राम/लीटर) केरऽ बहिर्जात अनुप्रयोग स॑ H2O2 (96.05 ± 5.33 nmol.g−1 FW; चित्र 5A) आरू O2•− (32.69 ± 8.56 nmol.g−1 FW; चित्र 5B) दूनू अनुपचारित संक्रमित पौधक (क्रमशः 173.31 ± 12.06 आरू 149.35 ± 7.94 nmol.g−1 FW) आरू 50 मिलीग्राम/लीटर व्यावसायिक कवकनाशक सं उपचारित पौधाक कें संचय कें तुलना मे रिजोलेक्स-टी (क्रमशः 170.12 ± 9.50 आ 157.00 ± 7.81 nmol.g−1 fr wt) 72 घंटा पर। hpt के तहत H2O2 आरू O2•− के उच्च स्तर जमा होय गेलऽ छेलै (चित्र 5A, B) । तहिना टीसीए आधारित मैलोनडायल्डीहाइड (एमडीए) परख स॑ पता चललै कि एस. लेकिन एल-ओर्निथिन केरऽ बहिर्जात प्रयोग स॑ लिपिड पेरोक्साइडेशन म॑ काफी कमी आबी गेलै जेकरऽ प्रमाण उपचारित पौधा म॑ एमडीए सामग्री म॑ कमी ​​(33.08 ± 4.00 nmol.g fr wt) स॑ मिलै छै ।
चित्र 5. ग्रीनहाउस परिस्थितिक मे संक्रमण कें 72 घंटा बाद एस. (A) हाइड्रोजन पेरोक्साइड (H2O2; nmol g−1 FW) 72 hpt पर, (B) सुपरऑक्साइड आयन (O2•−; nmol g−1 FW) 72 hpt पर, (C) malondialdehyde (MDA; nmol g−1 FW) 72 hpt पर, (D) 72 hpt पर कुल घुलनशील फिनोल (mg GAE g−1 FW), (ई) 72 एचपीटी पर कुल घुलनशील फ्लेवोनोइड (mg RE g−1 FW), (F) 72 hpt पर कुल मुक्त अमीनो एसिड (mg g−1 FW), आरू (G) 72 hpt पर प्रोलाइन सामग्री (mg g−1 FW) । मान 5 जैविक प्रतिकृति (n = 5) कें औसत ± मानक विचलन (औसत ± एसडी) कें प्रतिनिधित्व करय छै. विभिन्न अक्षर उपचारक कें बीच सांख्यिकीय रूप सं महत्वपूर्ण अंतर कें संकेत करएयत छै (p < 0.05)।