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हाइड्रोजन सल्फाइड (H2S) केरऽ मानव शरीर प॑ कई तरह के शारीरिक आरू रोग संबंधी प्रभाव पड़ै छै । जैविक प्रयोगक मे एच 2 एस कें प्रभाव कें मूल्यांकन कें लेल सोडियम हाइड्रोसल्फाइड (NaHS) कें व्यापक रूप सं उपयोग औषधीय उपकरण कें रूप मे कैल जायत छै. हालांकि NaHS घोल सं H2S कें नुकसान मे मात्र किछु मिनट लगैत छै, मुदा किच्छू जानवरक कें अध्ययनक मे NaHS घोल कें उपयोग पेयजल मे H2S कें लेल दाता यौगिक कें रूप मे कैल गेल छै. ई अध्ययन ई जांच करलकै कि की चूहा/माउस के बोतल म॑ तैयार 30 μM के NaHS सांद्रता वाला पीना पानी कम स॑ कम 12-24 घंटा तलक स्थिर रह॑ सकै छै, जैसनऽ कि कुछ लेखकऽ न॑ सुझाव देल॑ छै । पेयजल मे NaHS (30 μM) कें घोल तैयार करूं आ तुरंत चूहा/मूस कें पानी कें बोतल मे डालूं. मिथाइलीन ब्लू विधि कें उपयोग सं सल्फाइड कें मात्रा कें माप कें लेल 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12 आ 24 घंटा पर पानी कें बोतल कें नोक आ अंदर सं नमूना एकत्र कैल गेलय. एकरऽ अलावा, नर आरू मादा चूहा क॑ दू सप्ताह तलक NaHS (30 μM) के इंजेक्शन देलऽ गेलऽ छेलै आरू सीरम सल्फाइड केरऽ सांद्रता क॑ हर दोसरऽ दिन पहिलऽ सप्ताह के दौरान आरू दोसरऽ सप्ताह के अंत म॑ मापलऽ गेलऽ छेलै । पानिक बोतल के नोक सं प्राप्त नमूना में NaHS घोल अस्थिर छल; 12 आ 24 घंटा के बाद क्रमशः 72% आ 75% के कमी आयल। पानिक बोतल कें अंदर सं प्राप्त नमूनाक मे, 2 घंटा कें भीतर NaHS मे कमी महत्वपूर्ण नहि छल; मुदा 12 आ 24 घंटाक बाद क्रमशः 47% आ 72% कम भेल । NaHS इंजेक्शन सं नर आ मादा चूहा के सीरम सल्फाइड के स्तर पर कोनो असर नै पड़ल. निष्कर्षतः, पेयजल सं तैयार NaHS घोल कें उपयोग एच 2 एस दान कें लेल नहि करबाक चाही, कियाकि घोल अस्थिर छै. प्रशासन कें इ मार्ग जानवरक कें अनियमित आ अपेक्षित सं कम मात्रा मे NaHS कें संपर्क मे आओत.
हाइड्रोजन सल्फाइड (H2S) के प्रयोग 1700 सं विष के रूप में भ रहल अछि; तथापि, एकटा अंतर्जात जैव संकेत अणु के रूप में एकर संभावित भूमिका के वर्णन अबे आ किमुरा द्वारा 1996 में कयल गेल छल.पिछला तीन दशक में, विभिन्न मानव प्रणाली में एच 2 एस के अनेक कार्य के स्पष्ट कयल गेल अछि, जाहि सं ई एहसास भेल अछि जे एच 2 एस दाता अणु के किछु बीमारी के इलाज या प्रबंधन में नैदानिक ​​अनुप्रयोग भ सकैत अछि ; देखू चिरिनो एट अल। एकटा हालक समीक्षाक लेल।
सोडियम हाइड्रोसल्फाइड (NaHS) कें व्यापक रूप सं उपयोग एकटा औषधीय उपकरण कें रूप मे कैल गेल छै जे बहुत सं कोशिका संवर्धन आ जानवरक कें अध्ययन मे एच 2 एस कें प्रभाव कें आकलन करय कें लेल कैल गेल छै5,6,7,8. लेकिन, NaHS कोनों आदर्श H2S दाता नै छै, कैन्हेंकि ई घोल म॑ तेजी स॑ H2S/HS- म॑ बदली जाय छै, पॉलीसल्फाइड स॑ आसानी स॑ दूषित होय जाय छै, आरू आसानी स॑ ऑक्सीकरण आरू वाष्पीकरण होय जाय छै4,9. बहुत जैविक प्रयोगऽ म॑ NaHS पानी म॑ घुल जाय छै, जेकरऽ परिणामस्वरूप निष्क्रिय वाष्पीकरण आरू H2S10,11,12 केरऽ नुकसान, H2S11,12,13 केरऽ सहज ऑक्सीकरण, आरू प्रकाश विघटन14 होय छै । मूल घोल म॑ मौजूद सल्फाइड H2S11 केरऽ वाष्पीकरण के कारण बहुत तेजी स॑ खतम होय जाय छै । खुला बर्तन मे एच 2 एस कें आधा जीवन (t1/2) लगभग 5 मिनट होयत छै, आ एकर सांद्रता लगभग 13% प्रति मिनट कम भ जायत छै10. यद्यपि NaHS घोल सं हाइड्रोजन सल्फाइड कें नुकसान मे मात्र किछु मिनट लगैत छै, मुदा किछु पशु अध्ययनक मे NaHS घोल कें उपयोग पेयजल मे हाइड्रोजन सल्फाइड कें स्रोत कें रूप मे 1-21 सप्ताह तइक कैल गेल छै, जे हर 12-24 घंटा पर NaHS युक्त घोल कें जगह लैत छै.15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26 इ प्रथा छै वैज्ञानिक अनुसंधान कें सिद्धांतक कें अनुरूप नहि, कियाकि दवाइयक कें खुराक अन्य प्रजातियक, खासकर मनुष्यक मे ओकर उपयोग कें आधार पर होबाक चाही.27
जैव चिकित्सा मे पूर्व नैदानिक ​​अनुसंधान कें उद्देश्य रोगी कें देखभाल या उपचार कें परिणामक कें गुणवत्ता मे सुधार करनाय छै. मुदा, अधिकांश जानवरक अध्ययनक परिणाम एखन धरि मनुक्ख मे अनुवाद नहिं भेल अछि28,29,30. एहि अनुवादात्मक असफलताक एकटा कारण पशु अध्ययनक पद्धतिगत गुणवत्ता पर ध्यान नहि देब सेहो अछि30 । अतः, ई अध्ययन के उद्देश्य ई जांच करना छेलै कि चूहा/माउस के पानी के बोतल म॑ तैयार करलऽ गेलऽ 30 μM NaHS घोल पीबै वाला पानी म॑ 12-24 घंटा तलक स्थिर रह॑ सकै छै, जैसनऽ कि कुछ अध्ययनऽ म॑ दावा करलऽ गेलऽ छै या सुझाव देलऽ गेलऽ छै ।
अइ अध्ययन मे सबटा प्रयोग ईरान मे प्रयोगशाला जानवरक कें देखभाल आ उपयोग कें लेल प्रकाशित दिशा निर्देशक कें अनुसार कैल गेलय31. अइ अध्ययन मे सबटा प्रयोगात्मक रिपोर्टक मे सेहो एआरआरआईवी दिशा निर्देशक कें पालन कैल गेलय32. शाहिद बेहेष्ठी चिकित्सा विज्ञान विश्वविद्यालय केरऽ अंतःस्रावी विज्ञान संस्थान केरऽ नैतिकता समिति न॑ ई अध्ययन म॑ सब प्रयोगात्मक प्रक्रिया क॑ मंजूरी द॑ देलकै ।
जिंक एसीटेट डाइहाइड्रेट (CAS: 5970-45-6) आरू निर्जल फेरिक क्लोराइड (CAS: 7705-08-0) क॑ बायोकेम, केमोपाहरामा (कोस्ने-सुर-लोयर, फ्रांस) स॑ खरीदलऽ गेलऽ छेलै । सोडियम हाइड्रोसल्फाइड हाइड्रेट (CAS: 207683-19-0) आरू N,N-डाइमिथाइल-पी-फेनिलीनडायमाइन (DMPD) (CAS: 535-47-0) क॑ सिग्मा-एल्ड्रिच (सेंट लुइस, एमओ, अमेरिका) स॑ खरीदलऽ गेलऽ छेलै । आइसोफ्लूरेन पिरामल (बेथलेहेम, पीए, अमेरिका) स खरीदल गेल छल । हाइड्रोक्लोरिक एसिड (HCl) मर्क (डार्मस्टैड, जर्मनी) स खरीदल गेल छल ।
पेयजल मे NaHS (30 μM) कें घोल तैयार करूं आ तुरंत चूहा/मूस कें पानी कें बोतल मे डालूं. ई एकाग्रता क॑ एच 2 एस केरऽ स्रोत के रूप म॑ NaHS के उपयोग करलऽ गेलऽ अनेक प्रकाशनऽ के आधार प॑ चुनलऽ गेलऽ छेलै; चर्चा खंड देखू। NaHS एकटा हाइड्रेटेड अणु छै जेकरा मे हाइड्रेशन कें पानी कें अलग-अलग मात्रा (अर्थात, NaHS•xH2O) भ सकय छै; निर्माता के अनुसार, हमरऽ अध्ययन म॑ प्रयोग करलऽ गेलऽ NaHS के प्रतिशत 70.7% (अर्थात, NaHS•1.3 H2O) छेलै, आरू हमन॑ अपनऽ गणना म॑ ई मान क॑ ध्यान म॑ रखलकै, जहाँ हमन॑ 56.06 g/mol के आणविक भार के प्रयोग करलकै, जे निर्जल NaHS के आणविक भार छै । जलयोजन के जल (जेकरा स्फटिकीकरण के जल भी कहलऽ जाय छै) पानी के अणु छै जे स्फटिकीय संरचना के निर्माण करै छै33 । हाइड्रेट कें भौतिक आ ऊष्मागतिकी गुण एनहाइड्रेट कें तुलना मे अलग-अलग होयत छै34.
पेयजल मे NaHS डालय सं पहिले विलायक कें पीएच आ तापमान कें माप करूं. तुरंत NaHS घोल कें जानवरक कें पिंजरा मे चूहा/मूस कें पानी कें बोतल मे डालूं. सल्फाइड कें मात्रा कें माप कें लेल 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, आ 24 घंटा पर नोक सं आ पानी कें बोतल कें अंदर सं नमूना एकत्र कैल गेलय. प्रत्येक नमूना लेला के तुरंत बाद सल्फाइड के माप लेल गेल। हमनें ट्यूब केरऽ नोक स॑ नमूना प्राप्त करलकै, कैन्हेंकि कुछ अध्ययनऽ स॑ पता चललै छै कि पानी केरऽ ट्यूब केरऽ छोटऽ छिद्र आकार H2S वाष्पीकरण क॑ कम स॑ कम करी सकै छै15,19 । ई मुद्दा बोतल मे देल गेल घोल पर सेहो लागू बुझाइत अछि । मुदा, पानिक बोतलक गर्दनमें घोलमें एहन नहिं छलैक, जकर वाष्पीकरण दर बेसी छलैक आ आटोक्सिडाइज भ रहल छलैक ; असल मे जानवर सब पहिने ई पानि पीने छल।
अध्ययन म॑ नर आरू मादा विस्तार चूहा के प्रयोग करलऽ गेलऽ छेलै । चूहों क॑ पॉलीप्रोपाइलीन पिंजरा (2-3 चूहा प्रति पिंजरा) म॑ मानक परिस्थिति (तापमान 21-26 °C, आर्द्रता 32-40%) म॑ 12 घंटा प्रकाश (7 बजे स॑ 7 बजे तलक) आरू 12 घंटा अन्हार (7 बजे स॑ 7 बजे तलक) के साथ रखलऽ गेलऽ छेलै । चूहाक कें नल कें पानी कें मुफ्त पहुंच छल आ ओकरा मानक चाउ (खोरक डैम पार्स कंपनी, तेहरान, ईरान) देल गेलय. उम्र मिलान (6 महीना) मादा (n = 10, शरीर के वजन: 190-230 ग्राम) आ नर (n = 10, शरीर के वजन: 320-370 ग्राम) विस्तार चूहों क॑ यादृच्छिक रूप स॑ नियंत्रण आरू NaHS (30 μM) उपचारित समूह (n = 5 प्रति समूह) म॑ विभाजित करलऽ गेलऽ छेलै । नमूना आकार निर्धारित करय कें लेल, हम KISS (Keep It Simple, Stupid) दृष्टिकोण कें उपयोग करलकय, जे पिछला अनुभव आ शक्ति विश्लेषण कें संयोजन करय छै35. हमनें सबसें पहलऽ 3 चूहा प॑ पायलट अध्ययन करलकै आरू औसत सीरम कुल सल्फाइड स्तर आरू मानक विचलन (8.1 ± 0.81 μM) निर्धारित करलकै । तखन, 80% शक्ति पर विचार करयत आ एकटा दू-तरफा 5% महत्व स्तर मानयत, हम एकटा प्रारंभिक नमूना आकार (n = 5 पिछला साहित्य कें आधार पर) निर्धारित करलकय जे प्रयोगात्मक जानवरक कें नमूना आकार कें गणना कें लेल फेस्टिंग द्वारा सुझाएल गेल पूर्व परिभाषित मान कें साथ 2.02 कें मानकीकृत प्रभाव आकार कें अनुरूप छल35. ई मान क॑ एसडी (2.02 × 0.81) स॑ गुणा करला के बाद, अनुमानित पता लगाय सकै वाला प्रभाव आकार (1.6 μM) 20% छेलै, जे स्वीकार्य छै । एकर मतलब छै कि n = 5/समूह समूहक कें बीच 20% औसत परिवर्तन कें पता लगावय कें लेल पर्याप्त छै. चूहों क॑ एक्सेल सॉफ्टवेयर 36 (पूरक चित्र 1) केरऽ यादृच्छिक कार्य के उपयोग करी क॑ नियंत्रण आरू NaSH-उपचारित समूहऽ म॑ यादृच्छिक रूप स॑ विभाजित करलऽ गेलऽ छेलै । ब्लाइंडिंग परिणाम स्तर पर करलऽ गेलऽ छेलै, आरू जैव रासायनिक मापन करै वाला अन्वेषकऽ क॑ समूह असाइनमेंट के बारे म॑ जानकारी नै छेलै ।
दूनू लिंगक कें NaHS समूहक कें 2 सप्ताह तइक पेयजल मे तैयार 30 μM NaHS घोल सं उपचार कैल गेलय; हर 24 घंटा पर ताजा घोल के आपूर्ति कैल जाइत छल, जाहि दौरान शरीर के वजन नापल जाइत छल. आइसोफ्लूरेन एनेस्थेसिया कें तहत सब चूहाक कें पूंछ कें नोक सं खून कें नमूना हर दोसर दिन पहिल आ दोसर सप्ताह कें अंत मे एकत्र कैल गेलय. रक्त नमूनाक कें 3000 ग्राम पर 10 मिनट तइक अपकेंद्रित्रित कैल गेलय, सीरम कें अलग कैल गेलय आ सीरम यूरिया, क्रिएटिनिन (Cr), आ कुल सल्फाइड कें बाद कें मापन कें लेल –80°C पर संग्रहित कैल गेलय. सीरम यूरिया क॑ एंजाइमी यूरेज विधि स॑ निर्धारित करलऽ गेलऽ छेलै, आरू सीरम क्रिएटिनिन क॑ व्यावसायिक रूप स॑ उपलब्ध किट (मैन कंपनी, तेहरान, ईरान) आरू एक स्वचालित विश्लेषक (सेलेक्ट्रा ई, सीरियल नंबर 0-2124, नीदरलैंड) के उपयोग करी क॑ फोटोमेट्रिक जाफे विधि स॑ निर्धारित करलऽ गेलऽ छेलै । यूरिया आरू सीआर के लेलऽ भिन्नता के इंट्रा- आरू इंटरएसे गुणांक २.५% स॑ कम छेलै ।
मिथाइलीन ब्लू (MB) विधि कें उपयोग पेयजल आ NaHS युक्त सीरम मे कुल सल्फाइड कें माप कें लेल कैल जायत छै; थोक घोल आ जैविक नमूना मे सल्फाइड कें माप कें लेल एमबी सब सं बेसि प्रयोग कैल जाय वाला तरीका छै11,37. एमबी विधि कें उपयोग कुल सल्फाइड पूल38 कें अनुमान लगावय आ जलीय चरण मे एच2एस, एचएस- आ एस2 कें रूप मे अकार्बनिक सल्फाइड कें मापन कें लेल कैल जा सकय छै39. एहि विधि मे सल्फर कए जिंक एसीटेट क उपस्थिति मे जिंक सल्फाइड (ZnS) क रूप मे अवक्षेपित कैल जाइत अछि11,38 । जस्ता एसीटेट अवक्षेपण अन्य क्रोमोफोर सं सल्फाइड कें अलग करय कें लेल सब सं बेसि प्रयोग कैल जाय वाला तरीका छै11. ZnS क॑ मजबूत अम्लीय परिस्थिति म॑ HCl11 के उपयोग करी क॑ पुनः घोललऽ गेलऽ छेलै । सल्फाइड फेरिक क्लोराइड (Fe3+ ऑक्सीकरण एजेंट के रूप म॑ काम करै छै) द्वारा उत्प्रेरक प्रतिक्रिया म॑ 1:2 के स्टोइकियोमेट्रिक अनुपात म॑ डीएमपीडी के साथ प्रतिक्रिया करी क॑ डाई एमबी बनाबै छै, जेकरऽ पता 670 एनएम40,41 प॑ स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप स॑ लगै छै । एमबी विधि केरऽ पता लगाबै के सीमा लगभग 1 μM11 छै ।
एहि अध्ययन मे प्रत्येक नमूना (घोल या सीरम) के 100 μL एकटा ट्यूब मे मिलाओल गेल छल; तखन 200 μL जस्ता एसीटेट (आसुत जल मे 1% w/v), 100 μL DMPD (7.2 M HCl मे 20 mM), आ 133 μL FeCl3 (1.2 M HCl मे 30 mM) मिलाओल गेल । मिश्रण क॑ 37 डिग्री सेल्सियस प॑ अंधेरे म॑ 30 मिनट तलक इन्क्यूबेशन करलऽ गेलऽ छेलै । घोल क॑ 10,000 ग्राम प॑ 10 मिनट तलक अपकेंद्रित्रित करलऽ गेलऽ छेलै, आरू सुपरनेटेंट केरऽ अवशोषण क॑ माइक्रोप्लेट रीडर (BioTek, MQX2000R2, Winooski, VT, USA) के उपयोग करी क॑ 670 एनएम प॑ पढ़लऽ गेलऽ छेलै । सल्फाइड सांद्रता ddH2O (पूरक चित्र 2) म॑ NaHS (0-100 μM) केरऽ अंशांकन वक्र के उपयोग स॑ निर्धारित करलऽ गेलऽ छेलै । मापन के लेल प्रयोग कयल गेल सब घोल ताजा तैयार कयल गेल छल । सल्फाइड मापन के लेलऽ भिन्नता के इंट्रा- आरू इंटरएसे गुणांक क्रमशः 2.8% आरू 3.4% छेलै । हमनें सोडियम थायोसल्फेट युक्त पेयजल आरू सीरम नमूना स॑ बरामद कुल सल्फाइड केरऽ निर्धारण भी किलेबंदी विधि के उपयोग करी क॑ करलकै42 । सोडियम थायोसल्फेट युक्त पेयजल आ सीरम नमूनाक कें लेल रिकवरी क्रमशः 91 ± 1.1% (n = 6) आ 93 ± 2.4% (n = 6) छल.
सांख्यिकीय विश्लेषण विंडोज कें लेल ग्राफपैड प्रिज्म सॉफ्टवेयर संस्करण 8.0.2 (ग्राफपैड सॉफ्टवेयर, सैन डिएगो, सीए, अमेरिका, www.graphpad.com) कें उपयोग सं करल गेलय छेलै. NaHS जोड़य सं पहिने आ बाद मे पेयजल कें तापमान आ पीएच कें तुलना करय कें लेल एकटा जोड़ीदार टी-टेस्ट कें उपयोग कैल गेलय. NaHS युक्त घोल म॑ H2S केरऽ नुकसान के गणना आधार रेखा अवशोषण स॑ प्रतिशत कमी के रूप म॑ करलऽ गेलऽ छेलै, आरू ई आकलन करै लेली कि नुकसान सांख्यिकीय रूप स॑ महत्वपूर्ण छेलै कि नै, हमन॑ एक तरफ स॑ दोहराबै वाला-उपाय एनोवा करलकै आरू ओकरऽ बाद डनेट केरऽ बहु तुलना परीक्षण करलकै । समय के साथ शरीर के वजन, सीरम यूरिया, सीरम क्रिएटिनिन, आरू कुल सीरम सल्फाइड के तुलना अलग-अलग लिंग के नियंत्रण आरू NaHS-उपचारित चूहों के बीच द्वि-तरफा मिश्रित (बीच-भीतर) एनोवा के उपयोग स॑ करलऽ गेलऽ छेलै आरू ओकरऽ बाद बोनफेरोनी पोस्ट हॉक परीक्षण करलऽ गेलऽ छेलै । दू-पूंछ वाला पी मान < 0.05 क॑ सांख्यिकीय रूप स॑ महत्वपूर्ण मानलऽ गेलऽ छेलै ।
पेयजल कें पीएच NaHS जोड़य सं पहिने 7.60 ± 0.01 आ NaHS जोड़य कें बाद 7.71 ± 0.03 (n = 13, p = 0.0029) छल. पेयजल कें तापमान 26.5 ± 0.2 छल आ NaHS जोड़य कें बाद 26.2 ± 0.2 भ गेलय (n = 13, p = 0.0128)। पीवय कें पानी मे 30 μM NaHS घोल तैयार करूं आ ओकरा पानी कें बोतल मे संग्रहित करूं. NaHS घोल अस्थिर होय छै आरू समय के साथ एकरऽ एकाग्रता कम होय जाय छै । पानी के बोतल के गर्दन स॑ नमूना लेला प॑ पहिलऽ घंटा के भीतर काफी कमी (68.0%) देखलऽ गेलै, आरू घोल म॑ NaHS सामग्री म॑ क्रमशः 12 आरू 24 घंटा के बाद 72% आरू 75% के कमी देखलऽ गेलै । पानी के बोतल स॑ मिललऽ नमूना म॑ २ घंटा तलक NaHS म॑ कमी ​​महत्वपूर्ण नै छेलै, लेकिन १२ आरू २४ घंटा के बाद क्रमशः ४७% आरू ७२% के कमी आबी गेलऽ छेलै । इ आंकड़ा संकेत करय छै कि पेयजल मे तैयार 30 μM घोल मे NaHS कें प्रतिशत 24 घंटा कें बाद प्रारंभिक मान कें लगभग एक चौथाई तइक घट गेलय छेलै, चाहे नमूना स्थान कें परवाह नै कैल गेल होय (चित्र 1) ।
चूहा/माउस कें बोतल मे पेयजल मे NaHS घोल (30 μM) कें स्थिरता. घोल तैयार करला के बाद पानी के बोतल के नोक आ भीतर स नमूना लेल गेल। आंकड़ा औसत ± एसडी (n = 6/समूह) कें रूप मे प्रस्तुत कैल गेल छै. * आ #, समय 0 कें तुलना मे P < 0.05.पानिक बोतल कें फोटोग्राफ मे बोतल कें नोक (खुलनाय कें साथ) आ शरीर कें दर्शाओल गेल छै. टिप आयतन लगभग 740 μL अछि ।
ताजा तैयार 30 μM घोल म॑ NaHS केरऽ सांद्रता 30.3 ± 0.4 μM (रेंज: 28.7-31.9 μM, n = 12) छेलै । लेकिन 24 घंटा के बाद NaHS के सांद्रता कम मान (औसत: 3.0 ± 0.6 μM) तक कम भ गेल। जैना की चित्र 2 मे दिखायल गेल छै, NaHS कें सांद्रता जेकरा सं चूहाक कें संपर्क मे आयल छल, अध्ययन अवधि कें दौरान स्थिर नहि छल.
मादा चूहों कें शरीर कें वजन समय कें साथ काफी बढ़ल (नियंत्रण समूह मे 205.2 ± 5.2 ग्राम सं 213.8 ± 7.0 ग्राम आ NaHS सं उपचारित समूह मे 204.0 ± 8.6 ग्राम सं 211.8 ± 7.5 ग्राम); तथापि, NaHS उपचारक शरीरक वजन पर कोनो प्रभाव नहि पड़ल (चित्र 3) । नर चूहों कें शरीर कें वजन समय कें साथ काफी बढ़ल (नियंत्रण समूह मे 338.6 ± 8.3 ग्राम सं 352.4 ± 6.0 ग्राम आ NaHS सं उपचारित समूह मे 352.4 ± 5.9 ग्राम सं 363.2 ± 4.3 ग्राम); तथापि, NaHS उपचारक शरीरक वजन पर कोनो प्रभाव नहि पड़ल (चित्र 3) ।
NaHS (30 μM) कें प्रशासन कें बाद मादा आ नर चूहों मे शरीर कें वजन मे परिवर्तन. आंकड़ा औसत ± एसईएम के रूप म॑ प्रस्तुत करलऽ गेलऽ छै आरू एकरऽ तुलना बोनफेरोनी तदर्थ परीक्षण के साथ विचरण के द्वि-तरफा मिश्रित (भीतर-बीच) विश्लेषण के उपयोग करी क॑ करलऽ गेलऽ छेलै । प्रत्येक समूह मे प्रत्येक लिंग के n = 5।
पूरा अध्ययन म॑ नियंत्रण आरू NaSH-उपचारित चूहा म॑ सीरम यूरिया आरू क्रिएटिन फॉस्फेट केरऽ सांद्रता तुलनीय छेलै । एकरऽ अलावा, NaSH उपचार स॑ सीरम यूरिया आरू क्रिएटिनक्रोम केरऽ सांद्रता प॑ कोनो प्रभाव नै पड़लै (तालिका १) ।
बेसलाइन सीरम कुल सल्फाइड सांद्रता नियंत्रण आरू NaHS-उपचारित नर (8.1 ± 0.5 μM बनाम 9.3 ± 0.2 μM) आरू मादा (9.1 ± 1.0 μM बनाम 6.1 ± 1.1 μM) चूहों के बीच तुलनीय छेलै । 14 दिन तइक NaHS प्रशासन सं नर या मादा चूहा मे सीरम कुल सल्फाइड कें स्तर पर कोनों प्रभाव नहि पड़ल (चित्र 4)।
NaHS (30 μM) कें प्रशासन कें बाद नर आ मादा चूहों मे सीरम कुल सल्फाइड सांद्रता मे परिवर्तन. आंकड़ा औसत ± एसईएम के रूप म॑ प्रस्तुत करलऽ गेलऽ छै आरू एकरऽ तुलना बोनफेरोनी तदर्थ परीक्षण के साथ विचरण के द्वि-तरफा मिश्रित (भीतर-भीतर) विश्लेषण के उपयोग करी क॑ करलऽ गेलऽ छेलै । प्रत्येक लिंग, एन = 5/समूह।
अइ अध्ययन कें मुख्य निष्कर्ष इ छै की NaHS युक्त पीवय कें पानी अस्थिर छै: चूहा/माउस कें पानी कें बोतल कें नोक सं आ अंदर नमूना लेला कें 24 घंटा बाद प्रारंभिक कुल सल्फाइड सामग्री कें लगभग एक चौथाई मात्र पता लगाएल जा सकएय छै. एकरऽ अलावा, चूहा क॑ NaHS घोल म॑ H2S केरऽ नुकसान के कारण अस्थिर NaHS सांद्रता के संपर्क म॑ आबी गेलऽ छेलै, आरू पीबै वाला पानी म॑ NaHS केरऽ जोड़ला स॑ शरीर केरऽ वजन, सीरम यूरिया आरू क्रिएटिन क्रोमियम, या कुल सीरम सल्फाइड प॑ कोनो प्रभाव नै पड़लै ।
अइ अध्ययन मे पेयजल मे तैयार 30 μM NaHS घोल सं H2S कें नुकसान कें दर लगभग 3% प्रति घंटा छल. बफर घोल (10 mM पीबीएस, पीएच 7.4 म॑ 100 μM सोडियम सल्फाइड) म॑ 8 h11 के दौरान समय के साथ सल्फाइड केरऽ सांद्रता म॑ 7% के कमी के रिपोर्ट करलऽ गेलऽ छेलै । हम पहिने NaHS के इंट्रापेरिटोनियल प्रशासन के बचाव ई रिपोर्ट क के केने छी जे पेयजल में 54 μM NaHS घोल सं सल्फाइड के नुकसान के दर लगभग 2.3% प्रति घंटा (पहिल 12 घंटा में 4%/घंटा आ तैयारी के बाद अंतिम 12 घंटा में 1.4%/घंटा)8. पहिने के अध्ययन43 म॑ NaHS घोल स॑ H2S केरऽ लगातार नुकसान मिललै, जेकरऽ मुख्य कारण छेलै वाष्पीकरण आरू ऑक्सीकरण । बुलबुला कें जोड़ने कें बिना सेहो एच 2 एस वाष्पीकरण कें कारण स्टॉक घोल मे सल्फाइड तेजी सं खतम भ जायत छै11. अध्ययन स॑ पता चललै छै कि पतलापन प्रक्रिया के दौरान, जेकरा म॑ लगभग 30-60 सेकंड लगै छै, वाष्पीकरण के कारण लगभग 5-10% H2S खतम होय जाय छै6 । घोल स॑ एच 2 एस के वाष्पीकरण क॑ रोकै लेली शोधकर्ता न॑ कई उपाय करलकै, जेकरा म॑ घोल क॑ हल्का हलचल12, स्टॉक घोल क॑ प्लास्टिक फिल्म6 स॑ ढकना, आरू घोल क॑ हवा म॑ कम स॑ कम संपर्क म॑ आना शामिल छै, कैन्हेंकि एच 2 एस वाष्पीकरण केरऽ दर हवा-तरल अंतरफलक प॑ निर्भर करै छै ।13 एच 2 एस केरऽ स्वतःस्फूर्त ऑक्सीकरण मुख्य रूप स॑ संक्रमण धातु आयन, खास करी क॑ फेरिक के कारण होय छै लोहा, जे पानी मे अशुद्धि छै.13 H2S कें ऑक्सीकरण कें परिणामस्वरूप पॉलीसल्फाइड (सहसंयोजक बंधन सं जुड़ल सल्फर परमाणु)11. एकरऽ ऑक्सीकरण स॑ बचै लेली, H2S युक्त घोल क॑ डिऑक्सीजनयुक्त विलायक म॑ तैयार करलऽ जाय छै44,45 आरू ओकरा बाद आर्गन या नाइट्रोजन स॑ 20-30 मिनट तलक शुद्ध करलऽ जाय छै ताकि डिऑक्सीजनेशन सुनिश्चित करलऽ जाय सक॑ ।11,12,37,44,45,46 डाइइथिलीनट्रिआमिनपेन्टाएसिटिक एसिड (DTPA) एक धातु किलेटर (10–4 M) छै जे HS-ऑक्सीजनेशन क॑ रोकै छै एरोबिक घोल। डीटीपीए केरऽ अभाव म॑ एचएस- केरऽ ऑटोऑक्सीडेशन दर 25°C प॑ लगभग 3 घंटा म॑ लगभग 50% होय छै37,47 । एकरऽ अलावा, चूँकि 1e-सल्फाइड केरऽ ऑक्सीकरण पराबैंगनी प्रकाश स॑ उत्प्रेरक होय छै, ई लेली घोल क॑ बर्फ प॑ संग्रहित करी क॑ प्रकाश स॑ बचाबै के चाही11 ।
जैना की चित्र 5 मे दिखायल गेल छै, NaHS पानी मे घुलला पर Na+ आ HS-6 मे विघटित भ जायत छै; ई विच्छेदन प्रतिक्रिया केरऽ pK1 द्वारा निर्धारित होय छै, जे तापमान प॑ निर्भर छै: pK1 = 3.122 + 1132/T, जहाँ T 5 स॑ 30°C तलक होय छै आरू डिग्री केल्विन (K), K = °C + 273.1548 म॑ मापलऽ जाय छै । HS- केरऽ pK2 (pK2 = 19) अधिक होय छै, ई लेली pH < 96.49 प॑ S2- केरऽ निर्माण नै होय छै या बहुत कम मात्रा म॑ बन॑ छै । एकरऽ विपरीत, HS- आधार के रूप म॑ काम करै छै आरू H2O अणु स॑ H+ क॑ स्वीकार करै छै, आरू H2O एसिड के रूप म॑ काम करै छै आरू H2S आरू OH- म॑ बदली जाय छै ।
NaHS घोल (30 μM) में घुल H2S गैस का गठन | aq, जलीय घोल; जी, गैस; ल, तरल। सब गणना ई मानैत अछि जे पानिक पीएच = 7.0 आ पानिक तापमान = 20 °C । BioRender.com के साथ बनाया गया।
NaHS घोल अस्थिर होय कें सबूत कें बावजूद, कईटा जानवरक कें अध्ययनक मे पीवय वाला पानी मे NaHS घोल कें उपयोग H2S दाता यौगिक कें रूप मे कैल गेल छै15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26 जइ मे हस्तक्षेप कें अवधि 1 सं 21 सप्ताह कें बीच छै (तालिका 2)। इ अध्ययनक कें दौरान, NaHS घोल कें हर 12 घंटा, 15, 17, 18, 24, 25 घंटा या 24 घंटा, 19, 20, 21, 22, 23 घंटा पर नवीनीकरण कैल गेलय. हमरऽ परिणाम स॑ पता चललै कि चूहा NaHS घोल स॑ H2S केरऽ नुकसान के कारण अस्थिर दवा सांद्रता के संपर्क म॑ आबी गेलऽ छेलै, आरू चूहा केरऽ पीबै वाला पानी म॑ NaHS सामग्री म॑ 12 या 24 घंटा म॑ काफी उतार-चढ़ाव होय गेलऽ छेलै (चित्र 2 देखऽ) । ई अध्ययनऽ म॑ स॑ दू न॑ रिपोर्ट करलकै कि पानी म॑ H2S केरऽ स्तर 24 h22 के दौरान स्थिर रहलऽ छै या 12 h15 के दौरान केवल 2-3% H2S के नुकसान देखलऽ गेलऽ छेलै, लेकिन ओकरा म॑ सहायक आंकड़ा या मापन के विवरण नै देलऽ गेलऽ छेलै । दूटा अध्ययन सं पता चलल छै कि पानी कें बोतल कें छोट व्यास एच 2 एस वाष्पीकरण कें कम सं कम कयर सकय छै15,19. लेकिन, हमरऽ परिणाम स॑ पता चललै कि ई पानी के बोतल स॑ H2S के नुकसान म॑ 12-24 घंटा के बजाय केवल 2 घंटा के देरी करी सकै छै । दुनू अध्ययन में ध्यान देल गेल अछि जे हम सब ई मानैत छी जे पेयजल में NaHS के स्तर में कोनो बदलाव नहिं भेल, कारण हम सब पानि में रंग परिवर्तन नहिं देखलहुं ; अतः हवा द्वारा H2S के ऑक्सीकरण महत्वपूर्ण नै छेलै19,20 । आश्चर्यजनक रूप स॑ ई व्यक्तिपरक विधि समय के साथ ओकरऽ एकाग्रता म॑ बदलाव क॑ मापै के बजाय पानी म॑ NaHS केरऽ स्थिरता के आकलन करै छै ।
NaHS घोल मे H2S कें नुकसान पीएच आ तापमान सं संबंधित छै. जैना की हमरऽ अध्ययन म॑ नोट करलऽ गेलऽ छै, पानी म॑ NaHS क॑ घोलला स॑ क्षारीय घोल केरऽ निर्माण होय छै50 । जब॑ NaHS पानी म॑ घुल जाय छै त॑ घुललऽ H2S गैस केरऽ निर्माण पीएच मान प॑ निर्भर करै छै6 । घोल केरऽ पीएच जतेक कम होय छै, H2S गैस अणु के रूप म॑ मौजूद NaHS केरऽ अनुपात ओतने अधिक होय छै आरू जलीय घोल स॑ सल्फाइड केरऽ नुकसान ओतने अधिक होय जाय छै11 । अइ मे सं कोनों अध्ययन मे NaHS कें लेल विलायक कें रूप मे उपयोग कैल जाय वाला पेयजल कें पीएच कें रिपोर्ट नहि कैल गेल छै. डब्ल्यूएचओ कें सिफारिशक कें अनुसार, जे अधिकतर देशक कें द्वारा अपनाएल जायत छै, पेयजल कें पीएच 6.5-8.551 कें सीमा मे होबाक चाही. एहि पीएच रेंज मे एच 2 एस के स्वतःस्फूर्त ऑक्सीकरण के दर लगभग दस गुना बढ़ि जाइत अछि13 । अइ पीएच रेंज मे पानी मे NaHS कें घोलला सं घुलल H2S गैस कें सांद्रता 1 सं 22.5 μM होयत, जे NaHS कें घोलय सं पहिले पानी कें पीएच कें निगरानी कें महत्व पर जोर दै छै. एकरऽ अलावा, उपरोक्त अध्ययन म॑ रिपोर्ट करलऽ गेलऽ तापमान सीमा (18-26 °C) के परिणामस्वरूप घोल म॑ घुललऽ H2S गैस केरऽ सांद्रता म॑ लगभग 10% के बदलाव होतै, कैन्हेंकि तापमान म॑ बदलाव स॑ pK1 म॑ बदलाव आबै छै, आरू pK1 म॑ छोटऽ परिवर्तन स॑ घुललऽ H2S गैस केरऽ सांद्रता प॑ काफी प्रभाव पड़॑ सकै छै48 । एकरऽ अलावा कुछ अध्ययनऽ के लम्बा अवधि (5 महीना)22, जेकरा दौरान तापमान म॑ बड़ऽ परिवर्तनशीलता के आशा छै, भी ई समस्या क॑ और बढ़ाबै छै ।
one21 कें छोड़िक कें सबटा अध्ययनक मे पेयजल मे 30 μM NaHS घोल कें उपयोग कैल गेलय. प्रयोग करलऽ गेलऽ खुराक (अर्थात 30 μM) क॑ समझै लेली कुछ लेखक न॑ ई बात के ओर इशारा करलकै कि जलीय चरण म॑ NaHS H2S गैस केरऽ ठीक वैसनऽ सांद्रता पैदा करै छै आरू H2S केरऽ शारीरिक सीमा 10 स॑ 100 μM होय छै, ई लेली ई खुराक शारीरिक सीमा के भीतर छै15,16 । दोसरऽ न॑ बतैलकै कि 30 μM NaHS प्लाज्मा H2S केरऽ स्तर क॑ शारीरिक सीमा के भीतर यानी 5–300 μM19,20 क॑ बनाए रख॑ सकै छै । हम 30 μM (pH = 7.0, T = 20 °C) के पानी म॑ NaHS के सांद्रता प॑ विचार करै छियै, जेकरऽ उपयोग कुछ अध्ययनऽ म॑ H2S के प्रभाव के अध्ययन लेली करलऽ गेलऽ छेलै । हम गणना कर सकै छियै कि घुललऽ H2S गैस केरऽ सांद्रता 14.7 μM छै, जे प्रारंभिक NaHS सांद्रता के लगभग 50% छै । इ मान अन्य लेखक द्ववारा वही शर्तक कें तहत गणना करल गेलय मान कें समान छै13,48.
हमर अध्ययन में, NaHS प्रशासन सं शरीर के वजन में कोनो बदलाव नहिं आयल; ई परिणाम नर चूहा22,23 आरू नर चूहा18 म॑ अन्य अध्ययनऽ के परिणाम के अनुरूप छै; लेकिन, दू अध्ययनऽ म॑ कहलऽ गेलऽ छै कि नेफ्रेक्टोमाइज्ड चूहा म॑ NaSH न॑ शरीर केरऽ वजन म॑ कमी ​​क॑ बहाल करी देलकै24,26, जबकि अन्य अध्ययनऽ म॑ शरीर केरऽ वजन प॑ NaSH केरऽ प्रशासन केरऽ प्रभाव के रिपोर्ट नै करलऽ गेलऽ छै15,16,17,19,20,21,25 । एकरऽ अलावा, हमरऽ अध्ययन म॑ NaSH केरऽ प्रशासन स॑ सीरम यूरिया आरू क्रिएटिन क्रोमियम केरऽ स्तर प॑ कोनो प्रभाव नै पड़लै, जे एगो आरू रिपोर्ट केरऽ परिणाम के अनुरूप छै25 ।
अध्ययन म॑ पता चललै कि 2 सप्ताह तलक पीबै वाला पानी म॑ NaHS डालला स॑ नर आरू मादा चूहा म॑ कुल सीरम सल्फाइड केरऽ सांद्रता प॑ कोनो असर नै पड़लै । ई निष्कर्ष सेन एट अल केरऽ परिणाम के अनुरूप छै । (16): पीने के पानी म॑ 30 μM NaHS के साथ 8 सप्ताह के उपचार न॑ नियंत्रण चूहा म॑ प्लाज्मा सल्फाइड केरऽ स्तर क॑ प्रभावित नै करलकै; तथापि, हुनका लोकनि कें रिपोर्ट छलनि जे एहि हस्तक्षेप सं नेफ्रेक्टोमाइज्ड चूहाक प्लाज्मा मे एच 2 एस केर स्तर मे कमी बहाल भ गेल. ली एट अल। (22) न॑ ई भी रिपोर्ट करलकै कि 5 महीना तलक पीबै वाला पानी म॑ 30 μM NaHS के साथ उपचार स॑ वृद्ध चूहा म॑ प्लाज्मा मुक्त सल्फाइड केरऽ स्तर म॑ लगभग 26% के बढ़ोत्तरी होय गेलै । अन्य अध्ययनक मे पेयजल मे NaHS कें मिलावा कें बाद परिसंचारी सल्फाइड मे बदलाव कें सूचना नहि देल गेल छै.
सात अध्ययनऽ म॑ सिग्मा NaHS15,16,19,20,21,22,23 के प्रयोग के रिपोर्ट करलऽ गेलऽ छै लेकिन हाइड्रेशन के पानी के बारे म॑ आरू विवरण नै देलऽ गेलऽ छै, आरू पांच अध्ययनऽ म॑ ओकरऽ तैयारी विधि म॑ इस्तेमाल करलऽ गेलऽ NaHS के स्रोत के जिक्र नै करलऽ गेलऽ छै17,18,24,25,26 । NaHS एकटा हाइड्रेटेड अणु छै आ एकर पानी कें हाइड्रेशन सामग्री भिन्न भ सकय छै, जे कोनों देल गेल मोलारिटी कें घोल तैयार करय कें लेल आवश्यक NaHS कें मात्रा कें प्रभावित करय छै. उदाहरण के लेल, हमरऽ अध्ययन म॑ NaHS सामग्री NaHS•1.3 H2O छेलै । एहि तरहें, एहि अध्ययन सभ मे वास्तविक NaHS सांद्रता रिपोर्ट कएल गेल सांद्रता सं कम भ सकैत अछि.
“एतेक अल्पकालिक यौगिकक एतेक दीर्घकालिक प्रभाव कोना भ’ सकैत अछि?” पोजगे एट अल.21 न॑ चूहा म॑ कोलाइटिस प॑ NaHS केरऽ प्रभाव के मूल्यांकन करतें समय ई सवाल पूछलकै । हुनका आशा छै कि भविष्य केरऽ अध्ययन ई सवाल के जवाब दै म॑ सक्षम होतै आरू अनुमान लगाय सकै छै कि NaHS घोल म॑ H2S के अलावा आरू डाइसल्फाइड भी अधिक स्थिर पॉलीसल्फाइड भी होय सकै छै जे NaHS21 के प्रभाव के मध्यस्थता करै छै । एकटा आरू संभावना ई छै कि घोल म॑ बनलऽ NaHS केरऽ बहुत कम सांद्रता केरऽ भी लाभकारी प्रभाव पड़॑ सकै छै । दरअसल, ओल्सन एट अल। प्रमाण उपलब्ध करौलक छै कि रक्त मे H2S के माइक्रोमोलर स्तर शारीरिक नै छै आ नैनोमोलर रेंज मे होबाक चाही या एकदम सं अनुपस्थित होबाक चाही13. एच 2 एस प्रोटीन सल्फेशन के माध्यम स कार्य क सकैत अछि, जे एकटा रिवर्सिबल पोस्ट-ट्रांसलेशनल संशोधन अछि जे बहुत रास प्रोटीन के कार्य, स्थिरता आ स्थानीयकरण के प्रभावित करैत अछि52,53,54. वास्तव मे, शारीरिक परिस्थिति मे, लगभग 10% सँ 25% बहुत रास यकृत प्रोटीन सल्फाइलेटेड होइत अछि53 । दुनू अध्ययन NaHS19,23 केरऽ तेजी स॑ विनाश क॑ स्वीकार करै छै लेकिन आश्चर्यजनक रूप स॑ कहलऽ गेलऽ छै कि “हम॑ रोजाना पीबै वाला पानी म॑ NaHS केरऽ एकाग्रता क॑ नियंत्रित करी लेल॑ छेलियै ।“23 एक अध्ययन म॑ गलती स॑ कहलऽ गेलऽ छै कि “NaHS एगो मानक H2S दाता छै आरू आमतौर प॑ नैदानिक ​​प्रयोग म॑ खुद H2S क॑ बदलै लेली प्रयोग करलऽ जाय छै ।“18
उपरोक्त चर्चा स॑ पता चलै छै कि वाष्पीकरण, ऑक्सीकरण आरू प्रकाश विघटन के माध्यम स॑ घोल स॑ NaHS के नुकसान होय ​​जाय छै, आरू यही वजह स॑ घोल स॑ H2S के नुकसान क॑ कम करै लेली कुछ सुझाव देलऽ जाय छै । सबसें पहलऽ, H2S केरऽ वाष्पीकरण गैस-तरल अंतरफलक13 आरू घोल केरऽ पीएच11 प॑ निर्भर करै छै; अत: वाष्पीकरण हानि कें न्यूनतम करय कें लेल, पानी कें बोतल कें गर्दन कें यथासंभव छोट बनाल जा सकय छै जैना की पहिने वर्णित छै15,19, आ पानी कें पीएच कें एकटा स्वीकार्य ऊपरी सीमा (अर्थात, 6.5-8.551) तइक समायोजित कैल जा सकय छै ताकि वाष्पीकरण कें नुकसान कें न्यूनतम कैल जा सकय11. दोसर, H2S केरऽ स्वतःस्फूर्त ऑक्सीकरण ऑक्सीजन केरऽ प्रभाव आरू पेयजल म॑ संक्रमण धातु आयन केरऽ उपस्थिति के कारण होय छै13, ई लेली पीबै वाला पानी केरऽ आर्गन या नाइट्रोजन स॑ डिऑक्सीजनीकरण44,45 आरू धातु किलेटर केरऽ उपयोग37,47 सल्फाइड केरऽ ऑक्सीकरण क॑ कम करी सकै छै । तेसर, एच 2 एस कें प्रकाश अपघटन कें रोकय कें लेल पानी कें बोतल कें एल्यूमीनियम पन्नी सं लपेटल जा सकय छै; ई प्रथा प्रकाश संवेदनशील सामग्री जेना स्ट्रेप्टोजोटोसिन55 पर सेहो लागू होइत अछि । अंत मे, अकार्बनिक सल्फाइड लवण (NaHS, Na2S, आ CaS) कें पेयजल मे घुलय कें बजाय गेवेज कें माध्यम सं देल जा सकय छै जैना की पहिने रिपोर्ट कैल गेल छै56,57,58; अध्ययनक सं पता चलल छै कि चूहाक कें गेवेज कें माध्यम सं देल गेल रेडियोधर्मी सोडियम सल्फाइड नीक सं अवशोषित भ जायत छै आ लगभग सब ऊतकक मे वितरित भ जायत छै59. आइ धरि, अधिकांश अध्ययन में अकार्बनिक सल्फाइड लवण इंट्रापेरिटोनियल रूप सं देल गेल अछि ; तथापि, नैदानिक ​​सेटिंग मे एहि मार्गक उपयोग बहुत कम होइत अछि60. दोसर दिस, मौखिक मार्ग मनुष्य मे प्रशासन कें सब सं आम आ पसंदीदा मार्ग छै61. अतः हम मौखिक गेवेज द्वारा कृंतक मे एच 2 एस दाता के प्रभाव के मूल्यांकन करबाक सलाह दैत छी ।
एकटा सीमा ई छै कि हम एमबी विधि के उपयोग करी क॑ जलीय घोल आरू सीरम म॑ सल्फाइड के मापन करलकै । सल्फाइड कें मापन कें विधियक मे आयोडीन अनुमापन, स्पेक्ट्रोफोटोमेट्री, विद्युत रासायनिक विधि (पोटेंशिओमेट्री, एम्पीरोमेट्री, कूलोमेट्रिक विधि आ एम्पेरोमेट्रिक विधि) आ क्रोमैटोग्राफी (गैस क्रोमैटोग्राफी आ उच्च प्रदर्शन तरल क्रोमैटोग्राफी) शामिल छै, जेकरा मे सब सं बेसि प्रयोग कैल जाय वाला विधि एमबी स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक विधि छै62. जैविक नमूनाक मे एच 2 एस कें मापन कें लेल एमबी विधि कें एकटा सीमा इ छै की इ सबटा सल्फर युक्त यौगिक कें मापयत छै आ मुक्त एच 2 एस 63 कें नहि, कियाकि इ अम्लीय परिस्थितिक मे कैल जायत छै, जेकर परिणामस्वरूप जैविक स्रोत सं सल्फर निकालल जायत छै64. मुदा, अमेरिकन पब्लिक हेल्थ एसोसिएशन के अनुसार, एमबी पानि में सल्फाइड के माप के मानक तरीका अछि65. अतः ई सीमा NaHS युक्त घोल के अस्थिरता पर हमरऽ मुख्य परिणाम क॑ प्रभावित नै करै छै । एकरऽ अलावा, हमरऽ अध्ययन म॑ NaHS युक्त पानी आरू सीरम नमूना म॑ सल्फाइड मापन के वसूली क्रमशः ९१% आरू ९३% छेलै । इ मान पइहले रिपोर्ट कैल गेलय सीमा (77–92)66 कें अनुरूप छै, जे स्वीकार्य विश्लेषणात्मक परिशुद्धता कें संकेत करय छै42. ध्यान देबऽ के बात छै कि हमनें राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (एनआईएच) केरऽ दिशा-निर्देशऽ के अनुसार नर आरू मादा चूहा दूनू के उपयोग करलकै ताकि पूर्व-नैदानिक ​​अध्ययनऽ म॑ केवल पुरुष जानवरऽ के अध्ययन प॑ अधिक निर्भरता स॑ बचलऽ जाय सक॑67 आरू जब॑ संभव होय त॑ नर आरू मादा चूहा दूनू क॑ शामिल करलऽ जाय68 । एहि बिन्दु पर दोसर लोकनि जोर देने छथि69,70,71।
निष्कर्षतः ई अध्ययन केरऽ परिणाम संकेत करै छै कि पेयजल स॑ तैयार करलऽ गेलऽ NaHS घोल केरऽ उपयोग ओकरऽ अस्थिरता के कारण एच 2 एस पैदा करै लेली नै करलऽ जाब॑ सकै छै । प्रशासन कें इ मार्ग जानवरक कें अस्थिर आ अपेक्षित सं कम स्तर कें NaHS कें संपर्क मे आओत; अतः ई निष्कर्ष मनुष्य पर लागू नै भ सकै छै ।
वर्तमान अध्ययन कें दौरान उपयोग कैल गेलय आ/अथवा विश्लेषण कैल गेल डाटासेट उचित अनुरोध पर संबंधित लेखक सं उपलब्ध छै.
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